Химия. Анализ органических соединений Методы анализа в технологии органических веществ
Методы анализа органических лекарственных веществ отличаются от методов анализа неорганических лекарственных веществ и имеют свои особенности. В отличие от неорганических большинство органических соединений не являются электролитами, поэтому для них не применимы реакции ионного типа. Исключение составляют: органические кислоты и их соли (а):
и минеральные кислоты, которые диссоциируют на ионы (б):
В то время как реакции между неорганическими соединениями, в большинстве своем, протекают мгновенно вследствие обмена между ионами, реакции органических веществ, как правило, идут медленно и часто их можно остановить на образовании промежуточных продуктов, т. е. можно наблюдать целый ряд превращении между исходным и конечным результатом. В то же время все органические соединения в большей или меньшей степени неустойчивы при высоких температурах, при сильном нагревании они полностью сгорают.
Для того чтобы установить принадлежность данного вещества к органическим соединениям. Необходимо, прежде всего, открыть в нем присутствие углерода. Иногда это не представляет затруднений, так как многие органические вещества при прокаливании обугливаются, т. е. превращаются в уголь, и тем самым подтверждают присутствие углерода. Но в целом ряде случаев органические вещества не обугливаются при прокаливании. Например, если нагревать спирт, он может испариться, а если он загорится, то сгорает без остатка. Поэтому наиболее надежным способом открытия углерода в органическом соединении является сжигание этого соединения с каким-либо окислителем.
В состав молекулы органического вещества могут входить, кроме углерода и водорода, другие неорганические элементы, часто галогены - Сl,. Вг, F, I
Как видно из приведенных формул, галоген в молекулах бромизовала, дииодтирозина и фторотана связан непосредственно с углеродом (ковалентная связь). Такие соединения не диссоциируют на ионы и поэтому определить галоген в молекуле обычными для него аналитическими реакциями (например, с раствором нитрата серебра) нельзя.
В этом случае для подтверждения наличия галогена в молекуле его надо перевести в ионогенное состояние. Для этой цели органическое вещество необходимо предварительно разрушить. Этот процесс носит название минерализации, которая проводится различными путями: сжиганием, окислением, нагреванием с гидроксидами, сплавлением со щелочными металлами др. В результате минерализации образуются простые неорганические вещества в виде галогеноводородных кислот или их солей (галогенидов), которые диссоциируют и могут быть открыты обычными для них аналитическими реакциями ионного типа.
Среди продуктов минерализации органического вещества обязательны СО 2 и Н 2 О, которые служат показателем органической природы вещества.
В анализе органических лекарственных веществ большое значение имеет определение соответствующих физических и химических показателей, которые могут служить не только для идентификации, но и для подтверждения чистоты лекарственных веществ.
Например, для твердых веществ одним из характерных показателей является температура плавления, для жидких - температура кипения, плотность, показатель преломления.
Эти показатели являются вполне определенными только для чистых веществ. .
При наличии в лекарственном веществе той или другой примеси температура плавления у твердых веществ понижается, а у жидких веществ температура кипения в процессе перегонки растет.
Показатель преломления, являясь величиной постоянной для чистого вещества, может сильно отклоняться в случае присутствия примесей. Однако определения этих показателей для органических лекарственных веществ недостаточно. Они дают лишь ориентировочное предварительное представление о чистоте лекарственного вещества. Для достоверности анализа необходимо наряду с определением физических и химических показателей проводить химический анализ.
Характерной особенностью органических лекарственных веществ является наличие в их молекулах так называемых функциональных групп, т. е. реакционноспособных атомов или групп атомов, определяющихся с помощью химических реакций.
Функциональные группы обусловливают подход к анализу органических лекарственных веществ, так как они обусловливают свойства веществ, определяют характер реакций идентификации и методов количественного определения того или иного лекарственного вещества. Зная реакции обнаружения отдельных функциональных групп, можно сознательно подойти к анализу любого сложного по структуре лекарственного вещества органической природы.
Функциональных групп очень много (около 100) и молекулы большинства лекарственных веществ имеют полифункциональный характер, т. е. содержат в молекуле одновременно несколько функциональных групп.
Контрольные вопросы для закрепления:
1. В чём состоит основное отличие лекарственных веществ органической природы от лекарственных веществ неорганической природы?
2. В чем основная особенность анализа органических лекарственных препаратов в отличии от неорганических?
3. Какие физические и химические показатели используются для подлинности органических лекарственных препаратов?
Обязательная:
1. Глущенко Н.Н., Плетнева Т.В., Попков В.А. Фармацевтическая химия. М.: Академия, 2004.- 384 с. с. 151-154
2. Государственная фармакопея Российской Федерации/ Издательство «Научный центр экспертизы средств медицинского применения», 2008.-704с.:ил.
Дополнительная:
1. Государственная фармакопея 11 изд., вып. 1-М: Медицина, 1987. - 336 с.
2. Государственная фармакопея 11 изд., вып. 2-М: Медицина, 1989. - 400 с.
3. Беликов В. Г.Фармацевтическая химия. – 3-е изд., М., МЕДпресс-информ- 2009. 616 с:ил.
Электронные ресурсы:
1. Фармацевтическая библиотека [Электронный ресурс].
URL:http://pharmchemlib.ucoz.ru/load/farmacevticheskaja_biblioteka/farmacevticheskaja_tekhnologija/9
2. Фармацевтические рефератики - Фармацевтический образовательный портал [Электронный ресурс]. URL: http://pharm-eferatiki.ru/pharmtechnology/
3. Компьютерное сопровождение лекции. Диск 1СD-RW.
Транскрипт
1 ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ ГОСУДАРСТВЕННОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ «ВОРОНЕЖСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ» ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ АНАЛИЗА ОРГАНИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ Методические указания для вузов Издательско-полиграфический центр Воронежского государственного университета 2008
2 Утверждено научно-методическим советом химического факультета 7 февраля 2008 г., протокол 3 Составители: С.И. Карпов, В.Ф. Селеменев, М.В. Матвеева, Н.А. Беланова Рецензент д-р хим. наук, профессор Г.В. Шаталин В методических указаниях представлены теоретические основы качественного и количественного определения органических веществ с использованием физико-химических методов анализа: хроматографии (ГЖХ, ВЭЖХ, ТСХ), спектральных методов (спектрофотометрии, ИК-спектроскопии); рассмотрены некоторые теоретические аспекты хроматографии, касающиеся основных параметров удерживания и эффективности разделения компонентов анализируемой смеси. Основное внимание уделяется описанию выполнения лабораторных работ, посвященных рассмотрению приемов и методов идентификации, качественному и количественному анализу органических веществ методами ГЖХ, ВЭЖХ, ТСХ, спектрофотометрией (УФ-, вид-), ИК-спектроскопией. Учебно-методическое пособие предназначено для студентов 5 курса вечернего отделения химического факультета и составлено в соответствии с программой спецкурса «Физико-химические методы анализа органических соединений», читаемого на кафедре аналитической химии Воронежского государственного университета. Для специальности: Химия 2
3 СОДЕРЖАНИЕ Введение Хроматографические методы анализа Классификация хроматографических методов Колоночная хроматография Теоретические основы газовой хроматографии Теоретические основы высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) Параметры удерживания и основные характеристики разделения веществ в колоночной газовой и жидкостной хроматографии Плоскостная хроматография Стадии хроматографического процесса, материалы и реагенты, применяемые в плоскостной хроматографии Основные характеристики разделения веществ в плоскостной хроматографии Спектральные методы анализа Спектральные параметры полосы поглощения Молекулярная абсорбционная спектроскопия в видимой и УФ-области электромагнитных излучений Характеристика спектрофотометрического определения Оптимальные условия фотометрического определения Количественный анализ абсорбционными методами Инфракрасная спектроскопия Некоторые характеристики молекулярных спектров Колебания двухатомной молекулы Групповые частоты и интерпретация спектра Практическая часть Работа 1. Нанесение неподвижной жидкой фазы на твердый носитель и заполнение колонки Работа 2. Определение оптимальной скорости потока газаносителя Работа 3. Определение содержания примесей в толуоле Работа 4. Идентификация органических соединений по индексам Ковача Работа 5. Определение микроколичеств ацетона в водопроводной воде Работа 6. Получение изотерм сорбции спиртов методом Глюкауфа
4 Работа 7. Качественное и количественное определение примесей салициловой кислоты в ацетилсалициловой кислоте (аспирине) методом обращено-фазовой ВЭЖХ Работа 8. Разделение и идентификация дикарбоновых кислот методом ТСХ в водно-органических подвижных фазах Работа 9. Определение содержания примесей в препаратах лекарственных веществ по данным ТСХ Работа 10. Качественное и количественное определение флавоноидов методом ТСХ Работа 11. Спектрофотометрическое определение содержания никотиновой кислоты в препарате Работа 12. Спектрофотометрическое определение содержания цианкобаламина для инъекций (витамина В12) Работа 13. Определение подлинности веществ по ИКспектрам образцов, диспергированных в бромиде калия Работа 14. Идентификация веществ по ИК-спектрам образцов в виде суспензии в вазелиновом масле Работа 15. Количественный анализ смеси изомеров ксилола по ИК-спектрам Список использованной литературы
5 ВВЕДЕНИЕ Использование физических явлений занимает одно из ведущих мест в анализе химических систем. Сегодня каждый, кто связан с химией или изучает состав вещества, обязан хорошо ориентироваться в физикохимических методах анализа. Можно выделить ряд методов, используемых в аналитической химии. Хроматографические, спектральные методы используют в большинстве научно-исследовательских лабораторий контроля качества производства. Следует отметить огромный интерес и практическое применение этих методов в различных областях деятельности человека и протекания хроматографических и оптических процессов в природе. Достаточно лишь перечислить области применения: анализ загрязнений окружающей среды, анализ пищи, лекарств, клинический анализ, токсикологическое и судебное применение и др. Место хроматографии в области молекулярного анализа органических соединений. Хроматография преобладает над другими методами разделения, не заменяя их. Об этом свидетельствуют данные проведенного в США опроса об использовании различных аналитических приборов в 3000 исследовательских центрах . Хроматографические приборы занимают одно из первых мест как по степени использования, так и по росту потребности в них. Однако проведение любого хроматографического анализа часто сопряжено с другими физико-химическими методами анализа. Оптические методы позволяют проводить качественное и количественное определение вещества. Для всестороннего анализа вещества на подлинность, наличие примесей количественное определение предполагает применение различных физико-химических методов. Чтобы охарактеризовать любое химическое соединение, необходимо знать его оптические свойства, способность к распределению и адсорбции на различных материалах, а также возможность его выделения. Следует подчеркнуть, что хроматографические, оптические методы (спектрофотометрия (УФ-, вид-), ИК-спектроскопия и др.) не конкурируют между собой, а гармонично дополняют друг друга. 1. ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ АНАЛИЗА В 2003 г. исполнилось 100 лет с момента открытия одного из наиболее плодотворных методов исследования состава сложных многокомпонентных смесей веществ хроматографии. Это открытие принадлежит русскому ботанику М.С. Цвету, который впервые не ограничился простым наблюдением явлений адсорбции растительных пигментов на порошкообразных адсорбентах, но понял, что в этих простых опытах перед ним приоткрылась завеса неизвестности, за которой поистине необозримые возможности изучения состава и свойств самых разнообразных веществ. 5
6 Впервые термины «хроматографический метод» и «хроматограмма» появляются в двух статьях М.С. Цвета в 1906 г., что же касается термина «хроматография», то мы находим его в публикациях того же года . «Хроматография (от греч. хроматос цвет) физический метод разделения, в котором разделяемые компоненты распределены между двумя фазами, одна из которых неподвижна (неподвижная фаза), в то время как другая (подвижная фаза) движется в определенном направлении» (терминология ИЮПАК, 1993 г. ). Однако хроматография является не только «физическим методом разделения». Хроматографию можно определить как науку о методах разделения, а также качественного и количественного определения компонентов жидких и газообразных смесей, основанных на их различной сорбции (адсорбции, распределении и др.) в динамических условиях. Динамические условия в простейшем случае создаются при движении анализируемой смеси компонентов (подвижная фаза) через слой сорбента (неподвижная фаза). Неподвижной фазой (НФ) в хроматографии могут быть твердые и жидкие сорбенты. Подвижной фазой (ПФ) газ или жидкость, проходящие через хроматографическую колонку Классификация хроматографических методов 1. По агрегатному состоянию фаз. Газовая хроматография подвижная фаза (ПФ) является газом; газотвердофазная (неподвижная фаза (НФ) твердое вещество), газожидкостная хроматография (неподвижная фаза жидкость). Жидкостная хроматография подвижная фаза жидкость; жидкость твердофазная хроматография (неподвижная фаза твердый сорбент), жидкость жидкостная хроматография (неподвижная фаза жидкость). 2. По форме неподвижной фазы. Колоночная хроматография (КХ). Планарная хроматография неподвижная фаза нанесена на плоскость (бумажная хром. (БХ)), хроматография в тонких слоях (ТСХ). 3. По механизму сорбции. Адсорбционная поглощение твердым сорбентом за счет сил межмолекулярного взаимодействия. Распределительная различная растворимость в подвижной и неподвижной фазах. Ионообменная различия в электростатическом взаимодействии ионов с ионогенными группами сорбентов. Осадочная различие в растворимости разделяемых веществ. Лигандообменная различие в способности образовывать координационные соединения с определяемым компонентом. 6
7 Эксклюзионная разделение, основанное на различии в размерах и формах молекул. 4. По способам проведения хроматографического процесса. Фронтальная, вытеснительная, элюентная Колоночная хроматография Теоретические основы газовой хроматографии Газовая хроматография (ГХ) метод разделения летучих соединений. Подвижной фазой в газовой хроматографии является газ или пар. В зависимости от состояния неподвижной фазы газовая хроматография подразделяется на газоадсорбционную, когда неподвижной фазой является твердый адсорбент, и газожидкостную, когда неподвижной фазой является жидкость, а точнее пленка жидкости на поверхности частиц твердого сорбента. Газохроматографическими методами могут быть проанализированы газообразные, жидкие и твердые вещества с молекулярной массой меньше 400, удовлетворяющие определенным требованиям: летучесть, термостабильность, инертность. Газовая хроматография один из самых современных методов многокомпонентного анализа. Его преимущества: экспрессность, высокая точность, чувствительность, автоматизация. ГХ относится к инструментальным методам анализа, так как для определения состава газовой фазы необходима не только хроматографическая система, но и достаточно сложная система термостатирования, детектирования. Блок-схема хроматографа приведена на рис Рис. 1.1 Рис Т термостатируемые зоны 1. Система подачи газа-носителя (подвижная фаза). Чаще всего это газовый баллон с инертным газом гелием, аргоном, азотом. 2. Дозатор-система ввода пробы. Представляет собой термостатированный испаритель, в который микрошприцем, шприцем или другим калиброванным устройством вводится заданный точный объем исследуемой смеси. Жидкие вещества, испаряясь, переходят в газообразную фазу, захватываются потоком газа-носителя и поступают в колонку (3). 7
8 3. Хроматографическая колонка стеклянная или металлическая трубка диаметром от 2 до 4 мм и длиной от 0,5 до 10 м, заполненная сорбентом (насадочная колонка). Наряду с насадочными, используются микронасадочные (диаметр 0,8 1,5 мм) и капиллярные (диаметр 0,1 0,8 мм) колонки длиной до 100 м. В колонке происходит разделение компонентов смеси. Поскольку на сорбируемость веществ очень сильно влияет температура, колонки термостатируют. 4. Детектор устройство, предназначенное для обнаружения изменений в составе газа, прошедшего через колонку. Показания детектора обычно преобразуются в электрический сигнал и передаются на регистрирующее устройство. Наиболее часто применяют детектор по теплопроводности (катарометр) и пламенно-ионизационный (ДИП), термо-ионизационный (ТИД), детектор электронного захвата (ЭЗД). Для регистрации стабильных, воспроизводимых результатов детектор термостатируют. 5. Регистратор прибор, фиксирующий или записывающий электрический сигнал, поступивший с детектора. Чаще всего в качестве регистратора применяют самописец или интегратор, в современных модификациях приборов ЭВМ. Методом ГХ проводят качественный и количественный анализ, более подробно рассмотренный в работах Теоретические основы высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) колоночная или планарная жидкостная хроматография, в которой применяют сорбенты с размером частиц 3 10 мкм, в результате чего резко возрастает эффективность хроматографического разделения. По полярности контактирующих фаз жидкостную хроматографию (как колоночную, так и планарную) условно разделяют на нормальнофазовую (НФХ) и обращенно-фазовую хроматографию (ОФХ). Нормально-фазовая хроматография жидкостная хроматография, в которой неподвижная фаза более полярна, чем подвижная. К такому варианту хроматографии относится жидкостно-адсорбционная хроматография с силикагелем и оксидом алюминия в качестве НФ. Также к НФХ можно отнести распределительный вариант ВЭЖХ, в котором разделение смеси на компоненты осуществляется за счет различия их коэффициентов распределения между двумя несмешивающимися фазами растворителем (подвижной фазой) и фазой на сорбенте (неподвижной фазой). Обращенно-фазовая хроматография жидкостная хроматография, в которой неподвижная фаза менее полярная, чем подвижная. Это вариант распределительной хроматографии, в котором используют сорбенты с привитыми неполярными (как правило, длинными алкильными или алкил- 8
9 силильными) группами и полярный растворитель (например, воднометанольные, водно-ацетонитрильные смеси). В ВЭЖХ порядка 70 % всех аналитических разделений проводят методом обращенно-фазовой хроматографии. Работа в режиме ОФХ характеризуется использованием неполярного сорбента и полярного элюента. Сорбентами являются силикагели с привитыми алкилсилильными группами различной длины (от С 2 до С 22) с прямой алкильной группой или с фенильными и дифенильными группами. Подвижные фазы (ацетонитрил, вода, спирты и их смеси), используемые в ОФХ, позволяют проводить детектирование в широком УФ-диапазоне, легко растворяют практически все важнейшие соединения, входящие в состав биологических объектов, лекарственных веществ и т. д. Широкое применение находит ОФ ВЭЖХ при определении чистоты лекарственных препаратов, этому и посвящена работа Параметры удерживания и основные характеристики разделения веществ в колоночной газовой и жидкостной хроматографии Хроматограмма (рис. 1.2) кривая, отображающая зависимость концентрации вещества в потоке ПФ на выходе из колонки, от времени с момента начала процесса (выходная кривая). Чаще пользуются элюентным (проявительным) методом. Выходная кривая представляется в форме пика (для одного вещества). Экспериментально измеряемыми в газовой и жидкостной хроматографии являются параметры , представленные на рис а) б) Рис Параметры удерживания веществ (а) и параметры хроматографического пика (б) в колоночной хроматографии t m время прохождения несорбируемого компонента (мертвое время). t R полное время удерживания компонентов это время от момента ввода 9
10 пробы до момента появления на выходе из колонки максимальной концентрации зоны соответствующего вещества. t" Ri = t Ri t m. (1) исправленное (приведенное) время удерживания. Ширина пика (W) длина сегмента, образованного нулевой линией и двумя касательными в точках перегиба пика между двумя точками пересечения касательных в точке перегиба с нулевой линией. Высотой пика считают либо величину h либо h". Удерживаемый объем V R пропорционален времени удерживания t R: V R = t U, где U объемная скорость ПФ. Исправленный (приведенный) объем V" R удерживания R V" R = V R V m, где V m объем подвижной фазы, необходимой для элюирования неудерживаемого вещества, или мертвый объем. Фактор удерживания (или коэффициент емкости) k i представляет собой отношение количеств компонента i в неподвижной (m i, s) и подвижной (m i,m) фазах, который связан с характеристиками удерживания k i =t R "/t m Отсюда или k i t R m =. 10 t t t Ri = (1+k i)t m. (2) Это основное уравнение, характеризующее удерживание в хроматографии. Как видно из уравнений (1, 2), фактор удерживания можно определить из данных хроматограммы. В практике газовой и жидкостной хроматографии удерживание двух соединений последовательно регистрируемых на хроматограмме характеризуют фактором разделения (α): " " " V R t (2) R l (2) R k (2) (2) α = = = = " " " V t l k. (3) R (1) R (1) Фактор разделения α иногда называют селективностью. Численное значение α всегда больше единицы. Однако α не описывает действительного разделения двух хроматографических пиков. Существуют два параметра это расстояние между пиками и их ширина. Они определяют, полностью ли разрешены (разделены) два хроматографических пика. Расстояние между пиками можно выразить как разность времен удерживания (Δt R), а ширину пика у его основания W определяют как расстояние между каса- m R (1) (1)
11 тельными к направляющим пиков (рис. 1.2б). Разрешение (R S) двух пиков определяется как " " 2(tr t (2) R) Δt (1) R RS = =, (4) (W1 + W2) (W0,5(1) + W0,5(2)) где W 0,5 ширина пика на половине высоты; R S безразмерная величина; Δt R и W должны быть выражены в одних и тех же единицах. Разрешение равно единице, если расстояние между двумя пиками равно средней ширине пика. При R S >1 пики должны быть разрешены. Однако полное разрешение может и не достигаться, если велика ширина пика у основания, т. е. велики размывающие эффекты. Степень размывания пика определяет эффективность колонки. Эффективность в хроматографии это способность системы «предотвращать» (ограничивать) размывание зон разделяемых веществ. Эффективность выражается числом теоретических тарелок N или высотой, эквивалентной теоретической тарелке (ВЭТТ). Теоретическая тарелка (Т.Т.) это участок слоя сорбента, на котором распределение вещества между двумя фазами завершается установлением равновесия. Число теоретических тарелок можно рассчитать по формуле: 2 2 t N 5,54 R = W или 16 tr N, (5) 0,5 W где t R полное время удерживания или эквивалентное этой величине полное расстояние удерживания вещества отрезок временной оси хроматограммы, соответствующий времени удерживания. W и W 0,5 ширина пика у основания и на половине его высоты соответственно (рис. 1.2б). ВЭТТ это высота слоя сорбента (колонки), необходимая для установления равновесия: H= L/ N, (6) где L длина слоя сорбента. Чем больше N и меньше Н, тем выше эффективность колонки. ВЭТТ зависит от скорости потока подвижной фазы (U). Эту зависимость можно представить в виде кривой в координатах H U, что позволяет определить минимальную ВЭТТ для данной хроматографической системы при некотором оптимальном значении скорости потока. 11
12 1.3. Плоскостная хроматография Стадии хроматографического процесса, материалы и реагенты, применяемые в плоскостной хроматографии (ПХ) К плоскостным относятся бумажная (БХ), в которой в качестве сорбента используется специальная бумага, и тонкослойная хроматография (ТСХ), в которой процессы разделения смеси веществ осуществляются в тонких слоях сорбента, нанесенного на инертную твердую подложку или в пленках пористого полимерного материала, а также электрохроматография. Метод ТСХ составляет основу скрининговых тестов в химических, промышленных, клинических, фармацевтических, биохимических и биологических лабораториях. Метод предложен в 1938 г. отечественными учеными Н.А. Измайловым и М.С. Шрайбером. Однако широкие возможности метода открыты позднее благодаря работам Ю. Кирхнера и Э. Шталя. Анализ методом ТСХ включает следующие стадии: отбор и подготовка к анализу пробы; предварительная обработка пластины; подготовку хроматографической камеры; нанесение образца; хроматографическое разделение веществ; удаление элюента с пластины; детектирование компонентов, идентификация веществ и полуколичественный анализ. Неподвижными фазами, применяемыми в ТСХ, служат те же материалы, что и в ВЭЖХ для разделений, основанных на адсорбции, распределении (нормально- или обращенно-фазовом), ионном обмене или эксклюзии. Сорбент (силикагель, оксид алюминия, целлюлоза, полиамиды, кизельгур) в виде мелко размолотых частиц размером 20 мкм наносится тонким слоем (мкм) на стеклянную, металлическую или полимерную пластину. В этом случае при развитии хроматограммы и ее длине 12 см достигается около 200 разделений. Одной из важных задач, которые стоят перед исследователем, является правильный выбор подвижной фазы (ПФ). В нормально-фазовой хроматографии (см. также раздел 1.2.2), как и в колоночном исполнении, с увеличением полярности растворителя элюирующая способность растет. Растворители при этом в меньшей степени сорбируются неподвижной фазой, поэтому коэффициенты распределения сорбируемых веществ между ПФ и НФ высокие. В обращенно-фазовом варианте с увеличением полярности растворителя элюирующая сила снижается. Подвижная фаза, поднимающаяся по слою сорбента за счет действия капиллярных сил, взаимодействует с газовой фазой. Поэтому предвари- 12
13 тельно, до начала процесса хроматографирования, проводят насыщение камеры и слоя сорбента растворителем, находящимся в паровой фазе, т. е. достигается состояние равновесия подвижной фазы с газовой фазой. В обычной камере состояние насыщения достигается примерно через 5 10 мин для растворителя с температурой кипения ниже С. Для насыщения камеры высококипящим растворителем требуется несколько часов. Предварительное насыщение слоя сорбента любым чистым растворителем увеличивает скорость перемещения фронта растворителя по слою и уменьшает значения хроматографической подвижности R f анализируемых веществ. Предварительному насыщению подвергаются как нормальные, так и обращенные фазы. При разделении веществ на нормальных (полярных) фазах для насыщения слоя сорбента предпочтительно использовать полярные составляющие многокомпонентных элюентов, а на ОФ неполярные. По способам хроматографирования различают линейную, круговую и антикруговую ТСХ. Наиболее широко используется линейный вариант хроматографирования. В этом случае пробы наносят на стартовую линию параллельно одной из сторон бумаги или пластины (см. работы 8 10). Последние помещают вертикально в хроматографическую камеру, на дно которой налит элюент, и проводят восходящую планарную хроматографию (рис. 1.3а). Линейное развитие хроматограмм можно осуществлять и горизонтально с подачей элюента с одной или с двух сторон (рис. 1.3б). Можно также использовать нисходящую вертикальную ТСХ и БХ. В круговой ПХ пробы наносят на некотором расстоянии от центра пластины по окружности, а элюент подают в центр (рис. 1.3в). В антикруговой ПХ пробы наносят по окружности по периферии пластины и элюент подают в направлении к центру пластины (рис. 1.3г). Рис Варианты хроматографирования в ПХ: а линейное вертикальное; б линейное горизонтальное; в круговое; г антикруговое При нанесении проб на пластину для получения воспроизводимых результатов необходимо соблюдать ряд требований. Первоначально проводят разметку пластины, отмечая линию старта. Существенным является постоянство расстояния линии нанесения проб от края или центра пластины (обычно 1 2 см) и линии погружения пластины в элюент (около 0,5 см) в случае линейного варианта хроматографирования. Ширина 13
14 стартовой зоны на пластине должна быть по возможности минимальной, для ТСХ 2 3 мм, для ВЭТСХ 1 мм. Для нанесения проб используют стеклянные или платиновоиридиевые капилляры, микропипетки, шприцы, а также специальные дозирующие устройства. В ТСХ объемы проб составляют 0,5 3,0 мкл, для ВЭТСХ ~ 200 нл. Для сохранения активности слоя адсорбента рекомендуется во время нанесения проб покрывать адсорбент выше линии нанесения стеклянной пластиной и наносить пробу по возможности быстро. При проведении идентификации наиболее просто эта процедура выполняется при наличии собственной окраски у разделяемых веществ. Идентификация неокрашенных соединений может проводиться с применением специфических химических реагентов или инструментальных методов. Идентификация по регистрации поглощения веществ в УФ-области или их собственной флуоресценции основана на введении в слой сорбента флуоресцирующих индикаторов (люминофоров), которые при облучении УФ-светом возбуждаются при такой длине волны, при которой детектируемые вещества поглощают. Они становятся хорошо видны в виде темных зон на зеленоватом светящемся фоне сорбента. При детектировании с помощью химических реагентов используют универсальные реагенты (серная кислота, KMnO 4, K 2 Cr 2 O 7, фосфорномолибденовая кислота (ФМК)) и специфические на индивидуальные соединения отдельных классов. Так, нингидрин используется для визуализации аминогрупп, хлорид железа (III) для фенолов, комплексообразующие реагенты для визуализации ионов металлов. Для опрыскивания пластин применяют пульверизаторы. При этом точность количественных определений зависит от качества детектирования. После визуализации разделенных веществ проводят обработку хроматограмм Основные характеристики разделения веществ в плоскостной хроматографии Сорбционные свойства системы в ТСХ характеризуются относительной скоростью перемещения (хроматографическая подвижностью) R f, которая рассчитывается из экспериментальных данных по уравнению: l Rf =, (7) L где l расстояние от стартовой линии до центра зоны: L расстояние, пройденное за это же время растворителем. Наиболее общий подход к качественному анализу основан на значениях R f. Хроматографическая подвижность является чувствительной характеристикой вещества, однако она существенно зависит от условий определения. Эта трудность преодолевается путем проведения опыта в строго фиксированных стандартных условиях, которые регламентируют размер пластин, толщину слоя сорбента, объем пробы, длину пути фронта раство- 14
15 рителя и другие факторы. При соблюдении стандартных условий получаются воспроизводимые значения R f, которые можно использовать в аналитических целях при сравнении с табличными, если они получены в тех же условиях опыта. Самым надежным является метод свидетелей, когда на стартовую линию рядом с пробой наносятся индивидуальные вещества, соответствующие предполагаемым компонентам смеси. Влияние различных факторов на все вещества будет одинаковым, поэтому совпадение R f компонента пробы и одного из свидетелей дает основания для отождествления веществ с учетом возможных наложений. Несовпадение R f интерпретируется более однозначно: оно указывает на отсутствие в пробе соответствующего компонента. По смыслу определения R f как свойство, характерное для данной системы, не должно зависеть от концентрации и других факторов. Опыт показывает, однако, что воспроизводимость и постоянство значений R f не всегда достаточны, особенно при анализе неорганических ионов. На R f влияет качество и активность сорбента, его влажность, толщина слоя, качество растворителя и другие факторы, не всегда поддающиеся достаточному контролю. На практике часто пользуются относительной величиной относительной подвижностью R f, отн: R f, отн R f, x =, (8) R где R f, х и R f, ст подвижность определяемого и стандартного веществ соответственно. Стандартное вещество (свидетель) в том же растворителе наносится на стартовую линию рядом с анализируемой пробой и, таким образом, хроматографируется в тех же условиях. Как и в других вариантах хроматографии эффективность разделения в ТСХ определяется числом теоретических тарелок (N) и высотой, эквивалентной теоретической тарелке ВЭТТ (H), которые могут быть рассчитаны по уравнениям: 2 l I N = 16 w H f, ст LR = 16 w f 2, (9) 2 L w = =, (10) N 16 R L где w ширина зоны в направлении движения элюента. Величина H характеризует размытие хроматографической зоны, N эффективность хроматографической пластины. f 15
16 сорбенте бывает минимальным, следовательно, концентрация вещества будет максимальна и чувствительность анализа увеличится. Уменьшение диаметра зерна в тонком слое приводит к увеличению продолжительности анализа и усиливает диффузное размывание. Количественные определения в ТСХ могут быть сделаны или непосредственно на пластинке, или после удаления вещества с пластинки. При непосредственном определении на пластинке измеряют тем или иным методом площадь пятна (например, с помощью миллиметровой кальки) и по заранее построенному градуировочному графику находят количество вещества. Применяют также прямое спектрофотометрирование пластинки с помощью фотоденситометров. Для количественных расчетов также предвалиния финиша элюента w 2 Δ X L w 1 линия старта l Разрешение R S (разрешающая способность) двух хроматографических зон определяется расстоянием между их центрами (ΔХ), отнесённым к среднеарифметическому их ширины (w 1) и (w 2) (рис. 1.4): R S 2ΔX = w + w 1 2. (11) Коэффициент разделения в тонком слое К f связан с числом теоретических тарелок и подвижностями R f уравнением K f R f, x1 R f, x2 = n, (12) R R f, x1 где R f, x1, R подвижности соседних компонентов смеси. f,x2 Теоретический анализ показывает, что при небольших значениях R и уменьшении длительности анализа размывание зоны вещества на f,x1 Рис Параметры удерживания веществ в ТСХ f, x2 16
17 рительно строят градуировочный график, используя оптическую плотность в центре пятна. Наиболее точным считается метод, в котором вещество после разделения удаляется с пластинки и анализируется спектрофотометрическим или иным методом. Удаление вещества с пластинки обычно производят механическим путем, хотя иногда применяют вымывание подходящим растворителем. 17
18 2. СПЕКТРАЛЬНЫЕ МЕТОДЫ АНАЛИЗА Среди физических методов при исследовании органических соединений, наряду с хроматографическими, наибольшее распространение получили спектральные методы. Наибольшую информацию можно получить при изучении взаимодействий вещества с электромагнитным излучением в широком интервале частот, начиная с радиоволн и заканчивая γ-лучами. При этом происходит изменение энергии молекул, которое определяется соотношением Δ E = E1 E2 = hν, (13) где Δ E изменение энергии системы; 1 2 энергии системы в различных состояниях; h постоянная Планка; ν частота излучения. При помещении молекулы в электромагнитное поле поглощение происходит только в случае выполнения условия Бора (13). При переходе из состояния Е 1 в Е 2 молекула поглощает энергию, при возвращении из состояния Е 2 в Е 1 излучает ее с той же частотой. Электромагнитный спектр охватывает огромную область длин волн или энергий. Основные области спектра, используемые в спектральном анализе: Интервал длин волн Участок спектра,1 нм, или м γ-излучение нм, или м Рентгеновское излучение нм, или м Ультрафиолетовое излучение нм, или, м Видимый свет нм, или 7, м Инфракрасное излучение м Микроволны, или СВЧ λ > 1 м Радиоволны 1 нм = 10 9 м. Молекулярный спектральный анализ предполагает качественное и количественное определение состава пробы по спектрам поглощения и испускания. Энергию молекулы в первом приближении можно разделить на три составляющие, связанные с вращением молекул как целого, колебаниями образующих молекулу атомов и движением электронов в молекуле. Молекулярные спектры очень сложны, находятся в различных областях длин волн (частот) и подразделяются на электронноколебательные, колебательно-вращательные и вращательные. Расположены они обычно в области см 1 (0,10 1,25 мкм); , см 1 (1,25 40 мкм); 2, см 1 (мкм) соответственно и характери- 18
19 зуют электронные переходы в молекулах, а также колебательные переходы с изменением колебательных в вращательных состояниях молекулы. Методы молекулярной абсорбционной спектроскопии основаны на измерении уменьшения интенсивности электромагнитного излучения, прошедшего через анализирумый образец. В зависимости от длины волны падающего света различают спектрофотометрию в ультрафиолетовой (УФ), видимой (вид) и инфракрасной (ИК) области электромагнитного излучения Спектральные параметры полосы поглощения Полоса поглощения (рис. 2.1) характеризуется следующими величинами: ν max значение частоты в максимуме полосы (характеризует положение полосы в ИК спектре); I λ пиковая интенсивность (в максимуме), т. е. значение, соответствующее максимальному поглощению энергии, отн. ед.: ν 2 ν 1 Q = I(ν) Δν интегральная интенсивность, соответствующая площади фигуры, ограниченной полосой поглощения в пределах ν 1 ν 2, см 1 ; Δν 1/2 полуширина полосы (ширина максимума поглощения на половине максимальной высоты). I λ I 1/2 Δν1/2 ν1 νmax ν2 ν,cm -1 Рис Контур полосы поглощения При изменении структуры молекулы в спектре наблюдается не только смещение v max, но и изменение величины Δν 1/2. Физический смысл спектральных величин: ν тах частота света при переходе с одного уровня на другой, см 1 ; Q интегральная интенсивность, 19
20 пропорциональная вероятности данного перехода. Чем больше Q, тем более вероятен переход электронов с одного уровня на другой. Зависимость интенсивности прошедшего через вещество света (с определенным значением длины волны) от концентрации вещества в пробе (если концентрация вещества выражается числом молей в дм 3 (моль/л)) и толщины слоя описывается математическим выражением, установленным опытным путем: di=-εcidl (14) или после интегрирования от нуля до l как I k λ lc λ = I 0 e λ, (15 а) формулируемым как закон Бугера Ламберта Бера, где I λ и I 0λ интенсивность прошедшего и падающего излучений, отн. ед.; k λ показатель поглощения при данной длине волны (поглощающая способность вещества); с молярная концентрация вещества, моль/л; l толщина слоя образца, см. Подстрочный индекс λ обычно опускают, предполагая проведение определений при данной длине волны. Записав выражение (15) в логарифмической форме, получим: ln(i o /I) = kcl. (15б) При переходе к десятичным логарифмам уравнение (15а) примет вид I = I εlc, (16) где ε показатель поглощения света (молярный коэффициент экстинкции), рассчитанный на единицу концентрации вещества и на единицу толщины слоя (константа, не зависящая от интенсивности падающего света и концентрации вещества, но зависящая от длины волны падающего света). Соотношение между константами k и ε составляет ε = 0,4343 k. Закон Бугера Ламберта Бера, записанный в форме уравнения (16), в аналитической химии применять неудобно, так как нет удобного способа измерения I и I 0 с одной стороны, и выражение имеет степенную зависимость от концентрации вещества. Чтобы учесть потери света на отражение и рассеивание, сравнивают интенсивность света, прошедшего через исследуемый раствор (I), с интенсивностью света, прошедшего через кювету с растворителем (I 0). Отношение светового потока, прошедшего через вещество, к потоку, упавшему на вещество I/I 0, называют коэффициентом пропускания (или просто пропусканием): 20
21 T I = 100 % (17) I 0 Величину отношения потока излучения, поглощенного данным веществом, к потоку излучения, упавшего на него (I 0 I)/I 0 = 1 Т, называют коэффициентом поглощения (или поглощением), а величину, обратную логарифму пропускания, оптической плотностью вещества. Таким образом, А = lg T /100 = lg I / I0 = lg I0/ I, (18а) А = εlc. (18б) При подчинении растворов закону поглощения наблюдается прямолинейная зависимость оптической плотности от концентрации вещества в растворе при постоянном значении l. Эта пропорциональность строго соблюдается только для монохроматических излучений (при определенной длине волны). Если концентрацию с выражают числом молекул n в 1 дм 3, то показатель поглощения k называют молекулярным показателем, относят к одной молекуле и обозначают через γ-. Если концентрацию с выражают числом грамм-молей в 1 л раствора, то показатель поглощения к называют молярным коэффициентом поглощения и обозначают через ε; его размерность л см 1 -моль 1. Соотношение между коэффициентами γ и ε записывают следующим образом: γn = cε, ε/γ = n/c = 6, / или ε = γ, γ = l, ε. Если вещество не имеет постоянного, точно известного состава и для него нельзя точно указать молярную массу, то в таких случаях принято использовать концентрацию С, которую выражают в мг/мл или в % (1мг/мл 0,1%), то показатель поглощения k называют удельным коэффициентом поглощения и обозначают Е. Его размерность % 1 см 1. Основной закон светопоглощения в этом случае следует записать как А = ElC. (18в) Закон аддитивности важное дополнение к закону Бугера Ламберта Бера. Сущность закона заключается в независимости поглощения индивидуального вещества от наличия других веществ, обладающих собственным поглощением, или безразличных к электромагнитному излучению. Математическая запись может быть представлена в следующем виде: 21
22 А = ε (19) ilc. i Для оценки степени поглощения анализируемого вещества проводят сравнение интенсивности излучения, прошедшего через испытуемый раствор с интенсивностью излучения, прошедшего через раствор, поглощение которого принимают равным нулю раствор сравнения. В качестве растворов сравнения обычно используют растворитель, на основе которого приготовлен раствор с содержанием всех компонентов, за исключением определяемого вещества. Очень важно в этом случае поддерживать постоянство состава растворителя и избегать изменения положения максимума поглощения, а также молярного коэффициента поглощения вещества в зависимости от состава раствора Молекулярная абсорбционная спектроскопия в видимой и УФ-области электромагнитных излучений Характеристика спектрофотометрического определения Абсорбционная спектроскопия в видимой и УФ-областях один из наиболее полезных для химиков методов количественного анализа. Важнейшими достоинствами спектрофотометрического и фотометрического методов являются следующие. 1. Широта применения. Многочисленные неорганические и органические вещества поглощают в видимой и УФ-областях, что делает возможным их количественное определение. Кроме того, многие непоглощающие соединения можно определять после превращения их в поглощающие путем соответствующей химической реакции. 2. Высокая чувствительность. Молярные коэффициенты поглощения обычно лежат в интервале; поэтому, как правило, можно определять концентрации в интервале М; нижний предел иногда можно довести до 10 6 или даже 10 7 М путем соответствующих изменений в методике. 3. Достаточно высокая избирательность. При правильно выбранных условиях можно найти интервал длин волн, в которых определяемое вещество является единственным поглощающим компонентом в пробе. Более того, перекрывание полос поглощения можно иногда исключить, сделав дополнительные измерения при других длинах волн. 4. Высокая точность. Относительная ошибка при определении концентрации спектрофотометрическими и фотометрическими методами обычно лежит в интервале 1 3 %. Используя специальную технику, можно часто снизить ошибки до нескольких десятых процента. 22
23 5. Простота и удобство. Спектрофотометрические и фотометрические измерения на современных приборах выполняются легко и быстро. Более того, метод часто можно автоматизировать для выполнения серийных анализов. Поэтому абсорбционный анализ широко применяют для химических определений при непрерывном контроле загрязнения атмосферы и воды, а также промышленных процессов Оптимальные условия фотометрического определения Выбор длины волны. Оптическую плотность рекомендуется измерять при длине волны, соответствующей максимуму поглощения, так как здесь наблюдается максимальное изменение оптической плотности на единицу концентрации, следовательно, можно ожидать строгого подчинения закону Бугера Ламберта Бера и меньшей погрешности из-за неточности при воспроизведении длины волны, установленной на приборе. Если в спектре имеется несколько полос, выбор останавливают на наиболее интенсивной, так как работа в области максимума позволяет обеспечить большую чувствительность определения. Плоские максимумы предпочтительнее, так как при этом меньше сказывается погрешность в установлении длины волны, чем в случае острых или круто спадающих участков кривой. При выборе оптимальной длины волны в фотометрическом анализе ориентируются также на наибольшее различие поглощения аналитической формы и исходных реагентов (для окрашенных соединений) (рис. 2.2). Толщина светопоглощающего слоя. Уравнение закона Бугера Ламберта Бера показывает, что чем больше толщина слоя (l), тем больше оптическая плотность, и, следовательно, тем больше при прочих равных условиях чувствительность определения. Однако бесконечно увеличивать толщину слоя (l) на практике невозможно: возрастают потери на рассеяние света, особенно при работе с растворами. Кюветы с толщиной слоя больше, чем пять сантиметров, для фотометрирования не применяются. оп оп оп Рис Принцип выбора оптимальной длины волны при фотометрическом определении: 1 поглощение исходного реагента; 2 поглощение аналитической формы 23
24 Оптическая плотность (или пропускание). Измерительные устройства фотометрических приборов устроены таким образом, что абсолютная ошибка Т обычно имеет постоянную величину во всем интервале значений Т. На рис. 2.3 показано, что при одной и той же погрешности Т абсолютная погрешность с существенно возрастает с увеличением концентрации раствора (с 2 > c 1, хотя Т 2 = Т 1). Относительная ошибка с/с будет уменьшаться с ростом концентрации и возрастать с увеличением абсолютной ошибки с. При каких значениях Т относительная ошибка с/с будет минимальна? Математически показано, что с/с является функцией величины Т (рис. 2.4). Относительная ошибка определения концентрации проходит через минимум при Т = 0,398 (А = 0,435). Расчеты и опыты показали, что измерения растворов, имеющих А > 2,0 и А < 0,03, характеризуются большими погрешностями. Отсюда концентрация определяемого вещества должна быть такова, чтобы оптическая плотность раствора находилась в пределах 0,03 < А < 2,00. Например, концентрация определяется: c =. Если молярный коэффици- 0, 435 ε λ l ент поглощения равен 10 3, то при толщине светопоглощающего слоя l = 1 см 0435, 4 c = = 435, 10 М l ΔT 1 ΔT 2 Δc 1 Δc 2 Рис Зависимость Т от с 24
25 Δc/c Рис Зависимость относительной погрешности от пропускания раствора Фотометрическая реакция. Многие органические и неорганические вещества поглощают в видимой и УФ-областях, что делает возможным их определение. Кроме того, многие непоглощающие соединения можно определять после превращения их в поглощающие путем соответствующей (фотометрической) химической реакции. Окрашенные соединения в растворе получают главным образом в результате реакций окислениявосстановления и комплексообразования, к которым предъявляют следующие требования. 1. Аналитический реагент должен быть введен в достаточном количестве для превращения всего определяемого вещества в аналитическую форму. 2. Следует выбирать только те реакции, которые протекают с большой скоростью, следовательно, состояние равновесия достигается в короткое время. 3. Исследуемые соединения должны быть устойчивыми во времени, нечувствительными к свету и достаточно интенсивно окрашены. 4. Если окрашенное соединение является комплексным, то оно должно иметь постоянный состав, малую константу диссоциации (т. е. быть достаточно устойчивым). Для выяснения оптимальных условий фотометрирования каждая система требует специального физико-химического исследования для установления необходимого ph раствора, концентрации реагента, устойчивости образующегося комплекса, влияния конкурирующих реакций и присутствия посторонних ионов на устойчивость комплексных ионов и т. д. Чувствительность метода. В общем случае чувствительность фотометрического анализа определяют по формуле: с min = А min /ε l. Задав А min = 0,01, при котором еще можно вести анализ, и при l = 1 см, ε = ,398
26 (свойственно многим окрашенным соединениям) получаем с min = 001, = М. l Количественный анализ абсорбционными методами Метод градуировочного графика. Основан на построении градуировочного графика в координатах А с. Для этого при определенной длине волны измеряют оптические плотности серии эталонных растворов, а также анализируемого раствора, затем по градуировочному графику определяют концентрацию вещества с x. Обычно градуировочные графики представляют собой прямую линию, идущую из начала координат. При отклонениях от закона Бугера Ламберта Бера, то есть при нарушении линейной зависимости А(с), число точек на графике должно быть увеличено. Однако линейная зависимость повышает точность определения. Основные ограничения метода связаны с трудностями приготовления эталонных растворов и учетом влияния так называемых третьих компонентов, то есть компонентов, которые находятся в пробе, сами не определяются, но на результат влияют. Метод молярного коэффициента поглощения. Если заранее известна средняя величина ε λ, определенная для нескольких стандартных растворов в совершенно идентичных условиях, то, зная толщину слоя кюветы, можно Aλ рассчитать концентрацию по формуле: c= x. ε λ l Ограничением метода является обязательное подчинение системы в исследуемом интервале концентраций закону Бера. Метод добавок. Этот метод применяют при анализе растворов сложного состава, так как он автоматически позволяет учесть влияние третьих компонентов. Сначала определяют оптическую плотность А x анализируемого раствора с концентрацией с x. Затем в анализируемый раствор добавляют известное количество определяемого компонента (с ст) и вновь измеряют оптическую плотность А x+ст. Так как А x = εl с x и А x+ст = εl (с x + с ст), то A x c x =, A x+ ст cx + cст A x cx = cст. (20) Ax+ ст Ax Концентрацию анализируемого вещества в методе добавок можно найти также по графику в координатах А x+ст = f(с ст) (рис. 2.5). 26
27 Рис Определение концентрации методом добавок График представляет прямую, экстраполяция которой до пересечения с осью абсцисс дает отрезок, равный -с x. Действительно, при А x+ст = 0 из уравнения (20) с x = - с ст. Определение смеси светопоглощающих веществ. Спектрофотометрический метод позволяет определить несколько светопоглощающих веществ в одном растворе без предварительного разделения. Большое практическое значение имеет частный случай такой системы анализ смеси двух окрашенных веществ. В соответствии с законом аддитивности светопоглощения для такой смеси веществ, например А и В, можно записать: A λ = l(ε 1 A,λ c 1 A + εb,λ c 1 B), A λ = l(ε 2 A,λ c 2 A + εb,λ c 2 B). Решение этой системы уравнений при l = 1 дает: Aλ ε 1 B,λ -A 2 λ ε 2 B,λ1 c A =, εa,λ ε 1 B,λ -ε 2 A,λ ε 2 B,λ1 Aλ ε 2 B,λ -A 1 λε 1 B,λ2 c A =. (21) ε ε -ε ε A,λ B,λ A,λ B,λ Длины волн λ 1 и λ 2, при которых следует проводить измерения оптической плотности, выбирают по спектрам поглощения веществ А и В. Особый интерес представляют спектральные участки, в которых одно из веществ свет не поглощает, а другое обладает интенсивным светопоглощением. Если, например, ε В,λ = 0, то вместо (21) будем иметь: A A ε A ε c = λ1 λ 2 Α, λ1 λ1 Α, λ 2 ; c =, A ε B ε ε Α, λ 1 Α, λ B, λ 1 2 Этот случай реализуется, например, при определении фенилаланина и триптофана. В области длин волн 279 нм поглощает только триптофан,
28 и он может быть определен по оптической плотности раствора при этой длине волны. При 257 нм свет поглощают оба компонента. Метод дифференциальной фотометрии. Абсорбционная спектроскопия является разностной, так как из поглощения раствора всегда вычитают поглощение растворителя, реагентов, примесей, кюветы и т. д. Дифференциальной спектроскопией называют такой метод определения, когда в качестве раствора сравнения используют раствор определяемого вещества с известной концентрацией. При дифференциальном способе измерения настройку на нуль прибора проводят с помощью поглощающих растворов с постоянной оптической плотностью. В зависимости от способа настройки различают метод высокого поглощения, метод низкого поглощения и метод предельной точности. По сути, дифференциальный способ измерения сводится к растяжению измерительной шкалы прибора. В методе высокого поглощения настройку на 100 % пропускания проводят по эталонному раствору с меньшей концентрацией, чем в исследуемом. Данный метод позволяет измерять пропускание сильно поглощающих растворов и таким образом определять сравнительно большие концентрации веществ. Но в подобных случаях высококонцентрированные растворы часто не подчиняются закону Бугера Ламберта Бера. Поэтому рекомендуется применять двусторонний дифференциальный способ измерения оптической плотности при построении градуировочного графика в качестве раствора сравнения выбирают не первый раствор серии эталонов, а тот, для которого произведение εc максимально. В методе низкого поглощения сначала устанавливают прибор на нуль, но вместо шторки используют раствор с большей концентрацией, чем в исследуемом растворе. Метод применим для растворов с оптической плотностью меньше 0,1. В методе предельной точности настройку на Т = 0 и Т = 100 % проводят по двум растворам. Концентрация в одном из них больше, а в другом меньше, чем в исследуемом растворе. При дифференциальном способе измерения повышается воспроизводимость измерений Инфракрасная спектроскопия Некоторые характеристики молекулярных спектров Если молекула поглощает или излучает относительно малые кванты энергии (на один-два порядка меньше, чем для возбуждения электронного спектра), наблюдается колебательный спектр молекулы. Изменение дипольного момента молекулы в момент возбуждения колеба- 28
29 тельного состояния является необходимым условием поглощения или испускания энергии. Наличие изменений дипольного момента при колебании зависит от симметрии системы. В двухатомной молекуле единственно возможным колебанием является движение атомов вдоль оси связи. В таких молекулах, как О 2, С1 2 и др., дипольный момент равен нулю, колебания этих молекул не сопровождаются поглощением ИК-излучения. Такие колебания называются неактивными в ИК-спектре. В молекулах типа СО, НС1 и др. центры положительных и отрицательных атомов не всегда совпадают, поэтому электронное распределение при поглощении инфракрасного излучения меняется, что приводит к изменению дипольного момента молекулы. Подобные колебания называются активными в ИК-области. Они могут взаимодействовать с электромагнитным излучением, поглощая энергию и приводя к появлению полосы поглощения в спектре. 1 2 Рис Колебания трехатомных молекул: а симметричные валентные колебания в нелинейной (1) и линейной (2) молекулах (ν s); b асимметричные колебания в нелинейной (1) и линейной (2) молекулах (ν as); c деформационные колебания в нелинейной молекуле (δ); d вырожденное колебание в линейной молекуле Инфракрасное излучение сообщает молекуле, находящейся в основном (самом низком) электронном состоянии, энергию, необходимую для переходов между вращательными и колебательными уровнями энергии. При поглощении молекулой того или иного кванта энергии происходит поглощение света определенной (характеристической) частоты, связанной, как правило, с функциональными группами и атомами в молекуле. Луч, проходящий через образец, ослабляется в области поглощения. Регистрируя интенсивность прошедшего излучения, получают кривую, на которой видны максимумы поглощения. Колебательные спектры молекул богаты полосами, каждая из которых соответствует возбуждению колебательного состояния определенной 29
Лекция 6 Хроматографические методы анализа План лекции 1. Понятия и термины хроматографии. 2. Классификация хроматографических методов анализа. Хроматографическое оборудование. 3. Виды хроматографии: газовая,
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ Спектрофотометрия в ОФС.1.2.1.1.0003.15 ультрафиолетовой и Взамен ОФС ГФ X, ОФС ГФ XI, видимой областях ОФС 42-0042-07 ГФ XII,
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ Тонкослойная хроматография ОФС.1.2.1.2.0003.15 Взамен ст. ГФ XI, вып.1 Хроматографический процесс, протекающий при движении
Открытие хроматографии(1903 г.) МИХАИЛ СЕМЕНОВИЧ ЦВЕТ (1872-1919) Основные этапы развития хроматографии 1903 г. Открытие хроматографии (Цвет М.С.) 1938 г. Тонкослойная или планарная хроматография (Измайлов
ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ 6 по дисциплине ФИЗИЧЕСКИЕ И ХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ АНАЛИЗА ЯДЕРНЫХ МАТЕРИАЛОВ СПЕКТРОФОТОМЕТРИЯ Фотоколориметрический анализ (молекулярная абсорбционная спектроскопия) относится к оптическим
Физико-химический анализ Фотометрический анализ Оптические методы анализа Атомно-адсорбционный анализ основанный на поглощении световой энергии атомами анализируемых веществ. Молекулярно-адсорбционный
8. Вопросы 1. Дайте определение хроматографии. 2. Какие особенности хроматографии позволяют достичь лучшего разделения веществ с близкими свойствами по сравнению с другими методами разделения. 3. Перечислите
ЛЕКЦИЯ 7 ХРОМАТОГРАФИЯ КАК МЕТОД РАЗДЕЛЕНИЯ, ИДЕНТИФИКАЦИИ И КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ Основные понятия и определения Различные классификации хроматографических методов Хемосорбционная хроматография
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ Хроматография на бумаге ОФС.1.2.1.2.0002.15 Взамен ст. ГФ XI, вып.1 Хроматографический процесс, протекающий на листе фильтровальной
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ Газовая хроматография ОФС.1.2.1.2.0004.15 Взамен ст. ГФ XI Газовая хроматография это метод разделения летучих соединений, основанный
ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Уральский государственный университет им. А.М. Горького» ИОНЦ «Экология и природопользование»
Общая характеристика и классификация методов инструментального анализа Инструментальные методы анализа основаны на зависимости физических свойств вещества от его природы, причем аналитический сигнал представляет
Лекция 3. Абсорбционная спектроскопия. Фотоколориметрия и спектрофотометрия. Спектральные методы анализа и исследования основаны на взаимодействии электромагнитных волн с веществом. Излучение направляется
АНАЛИЗ СПЕКТРА ПОГЛОЩЕНИЯ ОКРАШЕННОГО ВЕЩЕСТВА Левин С.С. Кубанский Государственный Технологический Университет Краснодар, Россия Свойство молекул и атомов поглощать свет определенной длины волны, характерных
Лабораторная работа 7б Хроматографическое определение состава газовой фазы почв. Хроматография (от греч. chroma, родительный падеж chromatos цвет, краска) - физико-химический метод разделения и анализа
1. Пояснительная записка 1.1. Требования к студентам Студент должен обладать следующими исходными компетенциями: базовыми положениями математических и естественных наук; владеть навыками самостоятельной
Газовая хроматография 1 Требования к веществам 1. Летучесть 2. Термостабильность (вещество должно испарятся без разложения) 3. Инертность Схема газового хроматографа 1 2 3 4 5 1. Баллон с газом-носителем
ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ АММОНИЯ В ВОДЕ. Зачем нужно знать содержание аммония в питьевой воде, воде бассейна. Присутствие иона аммония свидетельствует о наличии в воде органического вещества животного происхождения.
Спектрометрия в инфракрасной области ОФС.1.2.1.1.0002.15 ВзаменГФХ Взамен ст. ГФ XI, вып.1 Взамен ГФ XII, ч.1, ОФС 42-0043-07 Инфракрасные спектры (колебательные спектры) (ИК-спектры) возникают вследствие
Московский физико-технический институт (Государственный университет) Департамент молекулярной и биологической физики Физические методы исследования Лекция 9 Жидкостная хроматография Методы и техника г.
Физикохимические методы анализа Хроматография В основе метода хроматографии лежит явление сорбции Сорбция процесс поглощения газов, паров и растворенного вещества твердыми или жидкими сорбентами Виды
2 Методы анализа: 1. Химические методы. Химическое равновесие и его использование в анализе. Кислотно-основное равновесие. Сила кислот и оснований, закономерности их изменения. Функция Гаммета. Вычисление
МИНОБРНАУКИ РОССИИ НАЦИОНАЛЬНЫЙ ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ТОМСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ХИМИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ Аннотированная рабочая программа дисциплины Хроматографические методы анализа Направление подготовки
46. ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ РАЗДЕЛЕНИЯ Хроматографическими называют многостадийные методы разделения, в которых компоненты образца распределяются между двумя фазами неподвижной и подвижной. Неподвижная
БЕЛОРУССКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ХИМИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ КАФЕДРА АНАЛИТИЧЕСКОЙ ХИМИИ П Р О Г Р А М М А С П Е Ц И А Л Ь Н О Г О К У Р С А «ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ» ДЛЯ СТУДЕНТОВ 5 КУРСА СПЕЦИАЛЬНОСТИ
Физико-химический анализ Физико-химические методы анализа Физико-химические методы анализа (ФХМА) основаны на зависимости физических свойств вещества от его природы, причем аналитический сигнал представляет
АННОТАЦИЯ рабочей программы учебной дисциплины «Введение в хроматографические методы анализа» по направлению подготовки 04.03.01 Химия по профилю подготовки «Аналитическая химия» 1. Цели освоения дисциплины
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ «АМУРСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ» МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ПОГЛОЩЕНИЕ СВЕТА.
ПОНЯТИЕ ОБ АНАЛИТИЧЕСКОМ СИГНАЛЕ Информацию о качественном и количественном составе анализируемого объекта химик-аналитик получает из аналитического сигнала. Аналитический сигнал среднее значение результатов
01/2016:20224 2.2.24. АБСОРБЦИОННАЯ СПЕКТРОФОТОМЕТРИЯ В ИНФРАКРАСНОЙ ОБЛАСТИ Инфракрасные спектрофотометры применяют для записи спектров в области от 4000 см -1 до 650 см -1 (от 2,5 мкм до 15,4 мкм), а
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ Кеторолака трометамол ФС.2.1.0022.15 Кеторолака трометамол Ketorolacum trometamolum Взамен ГФ XII, ч.1, ФС 42-0242-07 (1RS)-5-Бензоил-2,3-дигидро-1H-пирролизин-1-карбоксилат
ОГЛАВЛЕНИЕ Предисловие....................................... 6 Список обозначений и сокращений.................... 9 Глава 1 Атомно-эмиссионный анализ......................... 11 Физические основы атомного
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ Электрофорез ОФС.1.2.1.0021.15 Взамен ст. ГФ XI, вып.1 Электрофорез метод анализа, основанный на способности заряженных частиц,
Аналитическая химия 4 семестр, Лекция 17. Модуль 3. Хроматография и другие методы анализа. Хроматография. Принцип и классификация методов. 1. Принцип хроматографического разделения. Стационарная и подвижная
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ Рамановская спектрометрия ОФС.1.2.1.1.0009.15 Вводится впервые Рамановская спектрометрия является экспрессным (1 2 с) и неразрушающим
Физикохимические методы анализа 1 Физико-химические методы анализа 2 Спектральные Вид энергии возмущения Электромагнитное излучение Измеряемое свойство Длина волны и интенсивность спектральной линии в
ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ ГОСУДАРСТВЕННОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ «САРАТОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ им. Н.Г. ЧЕРНЫШЕВСКОГО» В.И. Кочубей ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Московский физико-технический институт Департамент молекулярной и биологической физики Физические методы исследования Лекция 9 Газовая хроматография Техника и методы эксперимента г. Долгопрудный, 3 апреля
Министерство образования и науки Российской Федерации ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ «САРАТОВСКИЙ НАЦИОНАЛЬНЫЙ ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ
1. Перечень компетенций с указанием этапов (уровней) их формирования. ПК-1: способность использовать знания теоретических, методических, процессуальных и организационных основ судебной экспертизы, криминалистики
04.07 Московский физико-технический институт Департамент молекулярной и биологической физики Физические методы исследования Лекция 8 Хроматография г. Долгопрудный, 6 апреля 07г. План. История возникновения
Аналитические методы исследования состояния окружающей среды 1. Цель и задачи дисциплины Целью освоения дисциплины «Аналитические методы исследования состояния окружающей среды» является овладение основами
Водянкин Алексей Юрьевич кафедра ХТРЭ Физикохимические методы анализа Метод анализа Достаточно универсальный и теоретически обоснованный способ определения состава безотносительно к определяемому компоненту
Учебная программа составлена на основе образовательного стандарта ОСВО 1-31 05 01 2013 и учебного плана УВО G 31 153/уч. 2013 г. СОСТАВИТЕЛЬ: В.А.Винарский, доцент, кандидат химических наук, доцент РЕКОМЕНДОВАНА
Работа 4.20 Изучение поглощения света твердыми и жидкими телами Оборудование: фотоэлектрический колориметр-нефелометр ФЭК-60, набор образцов твердого тела, набор кювет с растворами разной концентрации.
Научно-технологическая компания СИНТЕКО М Е Т О Д И К А КОЛИЧЕСТВЕННОГО ХИМИЧЕСКОГО АНАЛИЗА КОФЕ И ЧАЯ НА СОДЕРЖАНИЕ КОФЕИНА МЕТОДОМ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ. ДЗЕРЖИНСК 1997г. 1 Настоящий документ распространяется
ПРАКТИЧЕСКИЕ ЗАНЯТИЯ 8 по дисциплине ФИЗИЧЕСКИЕ И ХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ АНАЛИЗА ЯДЕРНЫХ МАТЕРИАЛОВ ЛЮМИНЕСЦЕНТНЫЙ АНАЛИЗ 1 Интенсивность люминесценции и концентрация люминофора. Если интенсивность люминесценции
Лекция 5 Электронная спектроскопия. Спектроскопия в видимой и ультрафиолетовой (УФ) областях План лекции 1. Вероятности переходов между электронно-колебательновращательными состояниями. Принцип Франка-Кондона.
Методы исследования состава нефтей, газов и газокондесатов Лекция 7 Существующие методы исследования нефтей и н/продуктов можно разделить на: Общие методы анализа нефтей и нефтепродуктов: А) методы технического
Валидация аналитических методов: практическое применение. Писарев В.В., к.х.н., МВА, заместитель генерального директора ФГУП «Государственный научный центр по антибиотикам», Москва (www.pisarev.ru) Введение
Московский физико-технический институт (Государственный университет) Департамент молекулярной и биологической физики Физические методы исследования Лекция 8 Детекторы в хроматографии Жидкостная хроматография
ГОСТ Р 51435-99 Сок яблочный, сок яблочный концентрированный и напитки, содержащие яблочный сок. Метод определения содержания патулина с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии. ОКС 67.160.20
Лекция 14 Взаимодействие света с веществом Сегодня: вторник, 12 ноября 2013 г. Содержание лекции: Дисперсия света Групповая скорость Элементарная теория дисперсии Поглощение света Рассеяние света 1. Дисперсия
Дисперсия света. Тепловое излучение Лекция 7 Постникова Екатерина Ивановна доцент кафедры экспериментальной физики Дисперсия света Дисперсия света зависимость фазовой скорости света c (показателя преломления
Преимущества колонок Agilent AdvanceBio SEC для эксклюзионной хроматографии при анализе биофармацевтических препаратов Сравнение колонок различных производителей для повышения качества данных Обзор технической
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ Хроматография ОФС.1.2.1.2.0001.15 Взамен ст. ГФ XI, вып.1 Хроматографией называется метод разделения смесей веществ, основанный
АНАЛИТИЧЕСКАЯ ХИМИЯ УДК 543.544 АДСОРБЦИОННАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ В АНАЛИЗЕ БИОГАЗА 1999 г. М.В. Николаева НИИ химии ННГУ им. Н.И. Лобачевского Л.П. Прохорова Нижегородская станция аэрации Разработана методика
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Размещено на http://www.allbest.ru/
Особенности анализа органических соединений:
Реакции с органическими веществами протекают медленно с образованием промежуточных продуктов.
Органические вещества термолабильны, при нагревании обугливаются.
В основе фармацевтического анализа органических лекарственных веществ лежат принципы функционального и элементного анализа.
Функциональный анализ - анализ по функциональным группам, т.е. атомам, группам атомов или реакционным центрам, которые определяют физические, химические или фармакологические свойства препаратов.
Элементный анализ используют для испытания подлинности органических лекарственных веществ, содержащих в молекуле атомы серы, азота, фосфора, галогенов, мышьяка, металлов. Атомы этих элементов находятся в элементоорганических лекарственных соединениях в неионизированном состоянии, необходимым условием испытания их подлинности является предварительная минерализация.
Это могут быть жидкие, твердые и газообразные вещества. Газообразные и жидкие соединения в основном обладают наркотическим действием. Эффект снижается от F - Cl - Br - I. Йодопроизводные в основном обладают антисептическим действием. Связь C-F; C-I; C-Br; C-Cl является ковалентной, поэтому для фармацевтического анализа ионные реакции используют после минерализации вещества.
Подлинность препаратов жидких галогенпроизводных углеводородов устанавливают по физическим константам (температура кипения, плотность, растворимость) и по наличию галогена. Наиболее объективным является способ установления подлинности по идентичности ИК-спектров препарата и стандартных образцов.
Для доказательства наличия галогенов в молекуле используют пробу Бейльштейна и различные методы минерализации.
Таблица 1. Свойства галогенсодержащих соединений
Хлорэтил Aethylii cloridum (МНН Ethylchloride) |
Фторотан 1,1,1-трифтор-2хлор-2-бромэтан (МНН Halothane) |
Бромкамфора 3-бром-1,7,7,триметилбицикло-гептанон-2 |
|
Жидкость прозрачная, бесцветная, легко летучая, со своеобразным запахом, трудно растворима в воде, со спиртом и эфиром смешивается в любых соотношениях. |
Жидкость без цвета, прозрачная, тяжелая, летучая, с характерным запахом, мало растворима в воде, смешивается со спиртом, эфиром, хлороформом. |
Белый кристаллический порошок или бесцветные кристаллы, запаха и вкуса, очень плохо растворим в воде, легко в спирте и хлороформе. |
|
Bilignostum pro injectionibus Билигност Бис-(2,4,6-трийод-3-карбоксианилид) адипиновой кислоты |
Бромизовал 2-бромизовалерианил-мочевина |
||
Белый кристаллический порошок, слабо горького вкуса, практически не растворим в воде, спирте, хлороформе. |
Белый кристаллический порошок или бесцветные кристаллы со слабым специфическим запахом, мало растворим в воде, растворим в спирте. |
Проба Бейльштейна
Наличие галогена доказывается путем прокаливания вещества в твердом состоянии на медной проволоке. В присутствии галогенов, образуются галогениды меди, окрашивающие пламя в зеленый или сине-зеленый цвет.
Галогены в органической молекуле связаны ковалентной связью, степень прочности которой зависит от химического строения галогенпроизводного, поэтому для отщепления галогена перевода его в ионизированное состояние необходимы различные условия. Образовавшиеся галогенид-ионы обнаруживают обычными аналитическими реакциями.
Хлорэтил
· Метод минерализации - кипячение со спиртовым раствором щелочи (учитывая низкую температуру кипения, определение ведут с обратным холодильником).
CH 3 CH 2 Cl+KOH c KCl +C 2 H 5 OH
Образовавшийся хлорид-ион обнаруживают раствором серебра нитрата по образованию белого творожистого осадка.
Сl- + AgNO 3 > AgCl + NO 3 -
Фторотан
· Метод минерализации - сплавление с металлическим натрием
F 3 C-CHClBr + 5Na + 4H 2 O> 3NaF + NaCl + 2NaBr + 2CO 2
Образовавшиеся хлорид- и бромид -ионы обнаруживают раствором серебра нитрата по образованию белого творожистого и желтоватого осадков.
Фторид-ион доказывают реакциями:
Реакция с раствором ализаринового красного и раствором нитрата циркония, в присутствии F- красное окрашивание переходит в светло-желтое;
Взаимодействие с растворимыми солями кальция (выпадает белый осадок фторида кальция);
Реакция обесцвечивания роданида железа (красный).
· При добавлении к фторотану конц. H 2 SO 4 , препарат находится в нижнем слое.
Бромизовал
· Метод минерализации - кипячение со щелочью (щелочной гидролиз в водном растворе), появляется запах аммиака:
· Нагревание с конц. серной кислотой - запах изовалериановой кислоты
Бромкамфора
· Метод минерализации методом восстановительная минерализация (с металлическим цинком в щелочной среде)
Бромид-ион определяют реакцией с хлорамином Б.
Билигност
· Метод минерализации - нагревание с концентрированной серной кислотой: отмечается появление фиолетовых паров молекулярного йода.
· ИК-спектроскопия - 0,001% раствор препарата в 0,1 н растворе натрия гидроксида в области от 220 до 300 нм имеет максимум поглощения при л=236 нм.
Йодоформ
· Методы минерализации:
1) пиролиз в сухой пробирке, выделяются фиолетовые пары йода
4CHI 3 + 5O 2 > 6I 2 + 4CO 2 + 2H 2 O
2) нагревание с конц. серной кислотой
2CHI 3 + H 2 SO 4 > 3I 2 + 2CO 2 + 2H 2 O + SO 3
Доброкачественность (чистота галогенсодержащих углеводородов).
Проверку доброкачественности хлорэтила и фторотана проводят, устанавливая кислотность или щелочность, отсутствие или допустимое содержание стабилизаторов (тимола во фторотане - 0,01%), посторонних органических примесей, примесей свободного хлора (брома во фторотане), хлоридов, бромидов, нелетучего остатка.
1) Хлорэтил: 1. Определяют t кипения и плотность,
2. Недопустимую примесь спирта этилового (реакция образования йодоформа)
2) Билигност: 1. Нагревание с кH 2 SO 4 и образование фиолетовых паров I 2
2. ИК-спектроскопия
3) Фторотан: 1. ИК-спектроскопия
2. t кипения; плотность; показатель преломления
3. не должно быть примесей Cl- и Br-
Количественное определение хлорэтила ГФ не предусматривает, но оно может быть выполнено методом аргентометрии или меркуриметрии.
Метод количественного определения - обратное аргентометрическое титрование по Фольгарду после минерализации (реакцию см. в определении подлинности).
1. Реакция перед титрованием:
фармацевтический лекарственный хлорэтил титрование
NaBr + AgNO 3 > AgBrv+ NaNO 3
2. Реакция титрования:
AgNO 3 + NH 4 SCN > AgSCN v + NH 4 NO 3
3. В точке эквивалентности:
3NH 4 SCN + Fe(NH 4)(SO 4) 2 >
Метод количественного определения - аргентометрическое титрование по Кольтгоффа после минерализации (реакции см. в определении подлинности).
1. Реакция перед титрованием:
3NH 4 SCN + Fe(NH 4)(SO 4) 2 > Fe (SCN) 3 + 2 (NH 4) 2 SO 4
точное количество буровато-красный
2. Реакция титрования:
NaBr + AgNO 3 > AgBrv+ NaNO 3
3. В точке эквивалентности:
AgNO 3 + NH 4 SCN > AgSCNv + NH 4 NO 3
обесцвечивание
Билигност
Метод количественного определения - косвенная йодометрия после окислительного расщепления билигноста до йодата при нагревании с раствором перманганата калия в кислой среде, избыток перманганата калия удаляют с помощью нитрата натрия, а для удаления избытка азотистой кислоты к смеси прибавляют раствор мочевины.
Титрант - 0,1 моль/л раствор натрия титсульфата, индикатор - крахмал, в точке эквивалентности наблюдают исчезновение синей окраски крахмала.
Схема реакции:
t; KMnO 4 +H 2 SO 4
RI 6 > 12 IO 3 -
Реакция выделения заместителя:
КIO 3 + 5KI + 3H 2 SO 4 >3I 2 + 3K 2 SO 4 + 3H 2 O
Реакция титрования:
I 2 +2Na 2 S 2 O 3 > 2NaI+Na 2 S 4 O 6
Йодоформ
Метод количественного определения - обратное аргентометрическое титрование по Фольгарду после минерализации.
Минерализация:
CHI 3 + 3AgNO 3 + H 2 O> 3AgI + 3HNO 3 + CO 2
Реакция титрования:
AgNO 3 + NH 4 SCN > AgSCN v + NH 4 NO 3
В точке эквивалентности:
3NH 4 SCN + Fe(NH 4)(SO 4) 2 > Fe (SCN) 3 v + 2 (NH 4) 2 SO 4
Хранение
Хлорэтил в ампулах в прохладном, защищенном от света месте, фторотан и билигност в склянках оранжевого стекла в сухом прохладном, защищенном от света месте. Бромкамфору хранят в склянках оранжевого стекла в сухом прохладном месте.
Хлорэтил используют для местной анестезии, фторотан для наркоза. Бромкамфору применяют в качестве седативного средства (иногда для остановки лактации). Бромизовал является снотворным средством, билигност применяют в качестве рентгеноконтрастного вещества в виде смеси солей в растворе.
Литература
1. Государственная фармакопея СССР / Министерство здравоохранения СССР. - Х изд. - М.: Медицина, 1968. - С. 78, 134, 141, 143, 186, 373,537
2. Государственная фармакопея СССР Вып. 1. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / Министерство здравоохранения СССР. - 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1989. - С. 165-180, 194-199
3. Лекционный материал.
4. Фармацевтическая химия. В 2 ч.: учебное пособие / В. Г. Беликов - 4-е изд., перераб. и доп. - М.: МЕДпресс-информ, 2007. - С. 178-179, 329-332
5. Руководство к лабораторным занятиям по фармацевтической химии. Под редакцией А.П. Арзамасцева, стр.152-156.
Размещено на Allbest.ru
Приложение 1
Фармакопейные статьи
Билигност
Бис-(2,4,6-трийод-З-карбоксианилид) адипиновой кислоты
C 20 H 14 I 6 N 2 O 6 M. в. 1139,8
Описание. Белый или почти белый мелкокристаллический порошок слабо горького вкуса.
Растворимость. Практически нерастворим в воде, 95% спирте, эфире и хлороформе, легко растворим в растворах едких щелочей и аммиака.
Подлинность. 0,001% раствор препарата в 0,1 н. растворе едкого натра в области от 220 до 300 нм имеет максимум поглощения при длине волны около 236 нм.
При нагревании 0,1 г препарата с 1 мл концентрированной серной кислоты выделяются фиолетовые пары йода.
Цветность раствора. 2 г препарата растворяют в 4 мл 1 н. раствора едкого натра, фильтруют и промывают фильтр водой до получения 10 мл фильтрата. Окраска полученного раствора не должна быть интенсивнее эталона № 4б или № 4в.
Проба с перекисью водорода. К 1 мл полученного раствора прибавляют 1 мл перекиси водорода; в течение 10--15 минут не должна появляться муть.
Соединения с открытой аминогруппой. 1 г препарата взбалтывают с 10 мл ледяной уксусной кислоты и фильтруют. К 5 мл прозрачного фильтрата прибавляют 3 капли 0,1 мол раствора нитрита натрия. Через 5 минут появившаяся окраска не должна быть интенсивнее эталона №2ж.
Кислотность. 0,2 г препарата встряхивают в течение 1 минуты с кипящей водой (4 раза по 2 мл) и фильтруют до получения прозрачного фильтрата. Объединенные фильтраты титрую! 0,05 н. раствором едкого натра (индикатор--фенолфталеин). На титрование должно расходоваться не более 0,1 мл 0,05 н. раствора едкого натра.
Хлориды. 2 г препарата взбалтывают с 20 мл воды и фильтруют до получения прозрачного фильтрата. 5 мл фильтрата, доведенные водой до 10 мл, должны выдерживать испытание на хлориды (не более 0,004% в препарате).
Фосфор. 1 г препарата помещают в тигель и озоляют до получения белого остатка. К остатку прибавляют 5 мл разведенной азотной кислоты и упаривают досуха, после чего остаток в тигле хорошо перемешивают с 2 мл горячей воды и фильтруют в пробирку через маленький фильтр. Тигель и фильтр промывают 1 мл горячей воды, собирая фильтрат в ту же пробирку, затем прибавляют 3 мл раствора молибдата аммония и оставляют на 15 минут в бане при температуре 38--40° Испытуемый раствор может иметь желтоватую окраску, но должен оставаться прозрачным (не более 0,0001% в препарате).
Иодмонохлорид. 0,2 г препарата взбалтывают с 20 мл воды и фильтруют до получения прозрачного фильтрата. К 10-мл фильтрата добавляют 0,5 г йодида калия, 2 мл соляной кислоты и 1 мл хлороформа. Хлороформный слой должен оставаться бесцветным.
Железо. 0,5 г препарата должны выдерживать испытание на железо (не более 0,02% в препарате). Сравнение проводят с эталоном, приготовленным из 3,5 мл эталонного раствора Б и 6,5 мл воды.
Сульфатная зола из 1 г препарата не должна превышать 0,1%.
Тяжелые металлы. Сульфатная зола из 0,5 г препарата должна выдерживать испытание на тяжелые металлы (не более 0,001% в препарате).
Мышьяк. 0,5 г препарата должны выдерживать испытание на мышьяк (не более 0,0001 % в препарате).
Количественное определение. Около 0,3 г препарата (точная навеска) помещают в мерную колбу емкостью 100 мл, растворяют в 5 мл раствора едкого натра, доливают водой до метки и перемешивают. 10 мл полученного раствора помещают в колбу емкостью 250 мл, прибавляют 5 мл 5% раствора перманганата калия и осторожно по стенкам колбы, при перемешивании, прибавляют 10 мл концентрированной серной кислоты по 0,5--1 мл и оставляют на 10 минут. Затем прибавляют медленно, по 1 капле через 2--3 секунды, при энергичном перемешивании. раствор нитрита натрия до обесцвечивания жидкости и растворения двуокиси марганца. После этого сразу прибавляют 10 мл 10% раствора мочевины и перемешивают до полного исчезновения пузырьков, смывая при этом со стенок колбы нитрит натрия. Затем к раствору прибавляют 100 мл воды, 10 мл свежеприготовленного раствора йодида калия и выделившийся йод титруют 0,1 н. раствором тиосульфата натрия (индикатор -- крахмал).
1 мл 0,1 н. раствора тиосульфата натрия соответствует 0,003166 г C 20 H 14 l 6 N 2 0 6 , которого в препарате должно быть не менее 99.0%.
Хранение. Список Б. В банках оранжевого стекла, в защищенном от света месте.
Рентгеноконтрастное средство.
Йодоформ
Трийодметан
СНI 3 М.в. 393,73
Описание. Мелкие пластинчатые блестящие кристаллы или мелкокристаллический порошок лимонно-желтого цвета, резкого характерного устойчивого запаха. Летуч уже при обыкновенной температуре, перегоняется с водяным паром. Растворы препарата быстро разлагаются от действия света и воздуха с выделением йода.
Растворимость. Практически нерастворим в воде, трудно растворим в спирте, растворим в эфире и хлороформе, мало растворим в глицерине. жирных и эфирных маслах.
Подлинность, 0,1 г препарата нагревают в пробирке на пламени горелки; выделяются фиолетовые пары йода.
Температура плавления 116--120° (с разложением).
Красящие вещества. 5 г препарата энергично взбалтывают в течение 1 минуты с 50 мл воды и фильтруют. Фильтрат должен быть бесцветным.
Кислотность или щелочность. К 10 мл фильтрата прибавляют 2 капли раствора бромтимолового синего. Появившееся желто-зеленое окрашивание должно перейти в синее от прибавления не более 0,1 мл 0,1 н. раствора едкого натра или в желтое от прибавления не более 0,05 мл 0,1 н. раствора соляной кислоты.
Галогены. 5 мл того же фильтрата, разведенные водой до 10 мл, должны выдерживать испытание на хлориды (не более 0,004% в препарате).
Сульфаты. 10 мл того же фильтрата должны выдерживать испытание на сульфаты (не более 0,01% в препарате).
Зола из 0,5 г препарата не должна превышать 0,1%.
Количественное определение. Около 0,2 г препарата (точная навеска) помещают в коническую колбу емкостью 250--300 мл, растворяют в 25 ли 95% спирта, прибавляют 25 мл 0,1 н. раствора нитрата серебра, 10 мл азотной кислоты и нагревают с обратным холодильником на водяной бане в течение 30 минут, защищая реакционную колбу от света. Холодильник промывают водой, в колбу прибавляют 100 мл воды и избыток нитрата серебра оттитровывают 0,1 н. раствором роданида аммония (индикатор -- железоаммониевые квасцы).
Параллельно проводят контрольный опыт.
1 мл 0,1 н. раствора нитрата серебра соответствует 0,01312 г СНI 3 , которого в препарате должно быть не менее 99,0%.
Хранение. В хорошо укупоренной таре, предохраняющей от действия света, в прохладном месте.
Размещено на Allbest.ru
Подобные документы
Понятие рефракции как меры электронной поляризуемости атомов, молекул, ионов. Оценка показателя преломления для идентификации органических соединений, минералов и лекарственных веществ, их химических параметров, количественного и структурного анализа.
курсовая работа , добавлен 05.06.2011
Основные операции при работе в лаборатории органической химии. Важнейшие физические константы. Методы установления строения органических соединений. Основы строения, свойства и идентификация органических соединений. Синтезы органических соединений.
методичка , добавлен 24.06.2015
Изучение теоретических основ методов осаждения органических и неорганических лекарственных веществ. Анализ особенностей взаимодействия лекарственных веществ с индикаторами в методах осаждения. Индикационные способы определения конечной точки титрования.
курсовая работа , добавлен 30.01.2014
Окислительная димеризация метана. Механизм каталитической активации метана. Получение органических соединений окислительным метилированием. Окислительные превращения органических соединений, содержащих метильную группу, в присутствии катализатора.
диссертация , добавлен 11.10.2013
Рассмотрение реакций, основанных на образовании комплексных соединений металлов и без их участия. Понятие о функционально-аналитической и аналитико-активной группах. Использование органических соединений как индикаторов титриметрических методов.
курсовая работа , добавлен 01.04.2010
Химическое строение - последовательность соединения атомов в молекуле, порядок их взаимосвязи и взаимного влияния. Связь атомов, входящих в состав органических соединений; зависимость свойств веществ от вида атомов, их количества и порядка чередования.
презентация , добавлен 12.12.2010
Изомерия как явление существования соединений, одинаковых по составу, но разных по строению и свойствам. Межклассовая изомерия, определяемая природой функциональной группы. Виды пространственной изомерии. Типы номенклатуры органических соединений.
презентация , добавлен 12.03.2017
Основные методы прогнозирования энтальпий образования органических соединений: методы молекулярной механики и аддитивные методы. Метод Бенсона и метод Татевского. Алкилбензолы и их функциональные производные: галогенбензолы, полифенилы, пиридины.
курсовая работа , добавлен 17.01.2009
Галогенирование ароматических соединений: механизм процесса. Расчет показателей при моно- и дихлорировании органических соединений. Расход реагента при максимальном выходе целевого продукта в сложных реакциях. Подбор подходящего механизма реакций.
реферат , добавлен 15.02.2012
Жизнь как непрерывный физико-химический процесс. Общая характеристика природных соединений. Классификация низкомолекулярных природных соединений. Основные критерии классификации органических соединений. Виды и свойства связей, взаимное влияние атомов.
ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «ЮЖНЫЙ ФЕДЕРАЛЬНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ» Сорокин В.И. ИДЕНТИФИКАЦИЯ ОРГАНИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ: ЭЛЕМЕНТНЫЙ И ФУНКЦИОНАЛЬНЫЙ АНАЛИЗ, ИССЛЕДОВАНИЕ РАСТВОРИМОСТИ Методические указания к спецкурсу «Структурный анализ органических соединений» Ростов-на-Дону 2007 1 Методические указания разработаны кандидатом химических наук, старшим преподавателем кафедры органической химии В.И. Сорокиным. Компьютерный набор и верстка ст. препод. В.И. Сорокина Печатается в соответствии с решением кафедры органической химии химического факультета ЮФУ, протокол № 1-2007-2008 от 30.09.2007 г. 2 Содержание Введение..................................................................................................................................................4 1 Качественный элементный анализ.....................................................................................................5 1.1 Обнаружение углерода и водорода.............................................................................................5 1.2 Проба Лассеня...............................................................................................................................7 1.3 Обнаружение азота.......................................................................................................................8 1.4 Обнаружение серы........................................................................................................................9 1.5 Обнаружение галогенов (общие реакции)................................................................................10 1.6 Открытие фтора...........................................................................................................................12 1.7 Обнаружение йода......................................................................................................................12 1.8 Идентификация брома................................................................................................................14 1.9 Обнаружение хлора....................................................................................................................14 1.10 Идентификация кислорода.......................................................................................................15 1.11 Открытие фосфора....................................................................................................................15 2 Исследование растворимости...........................................................................................................16 3 Функциональный анализ...................................................................................................................20 3.1 Обнаружение гидроксильной группы.......................................................................................20 3.2 Обнаружение фенолов................................................................................................................22 3.3 Обнаружение карбонильной группы альдегидов и кетонов...................................................24 3.3.1 Общие реакции.....................................................................................................................24 3.3.2 Реакции альдегидов.............................................................................................................25 3.4 Карбоновые кислоты и их производные...................................................................................27 3.4.1 Обнаружение карбоновых кислот......................................................................................27 3.4.2 Ангидриды и хлорангидриды кислот.................................................................................27 3.4.3 Обнаружение сложных эфиров..........................................................................................28 3.4.4 Амиды кислот.......................................................................................................................29 3.4.5 Нитрилы................................................................................................................................29 3.5 Качественные реакции аминов..................................................................................................30 3.5.1 Общие реакции аминов.......................................................................................................30 3.5.2 Реакции, позволяющие различить первичные, вторичные и третичные амины...........31 3.5.3 Обнаружение первичных аминов.......................................................................................35 3.5.4 Обнаружение первичных ариламинов...............................................................................36 3.5.5 Определение вторичных аминов........................................................................................37 3.5.6 Определение третичных аминов........................................................................................37 3.6 Нитрозосоединения....................................................................................................................38 3.6.1 Определение С-нитрозосоединений..................................................................................38 3.6.2 Определение N-нитрозосоединений..................................................................................39 3.7 Нитросоединения........................................................................................................................40 3.7.1 Общие реакции.....................................................................................................................40 3.7.2 Определение алифатических С-нитросоединений...........................................................40 3.7.3 Ароматические С-нитросоединения..................................................................................41 3.8 Углеводороды..............................................................................................................................42 3.8.1 Алкены и алкины.................................................................................................................42 3.8.2 Ароматические углеводороды............................................................................................43 Литература.............................................................................................................................................45 3 Введение Методы идентификации органических соединений, основанные на качественных химических реакциях, использовались химиками еще задолго до внедрения современных спектральных методов, таких как ИК- и ЯМР-спектроскопия, масс- спектрометрия, рентгеновская дифракция. Поэтому качественный анализ – одна из наиболее детально проработанных ступеней систематической идентификации. За вековую историю отбора были отвергнуты реакции, дающие невнятный визуальный результат или низкую селективность к данному классу соединений. Именно поэтому большая часть описанных в данном пособии реакций заключаются лишь в сливании двух реагентов и наблюдением за визуальными изменениями, происходящими в течение нескольких минут. Конечно, прогресс физических методов анализа отодвинул на второй план качественные химические реакции, которые при всех своих достоинствах не могли дать такой подробной информации не только о наличии функциональных групп, но и о конформациях и других особенностях строения молекулы, но это не означает, что они тихо канули в историю. Даже при всей мощи ЯМР- спектроскопии и подобных методов начинающему исследователю на начальных этапах трудно ориентироваться в сигналах, характеристических полосах поглощения, специфической фрагментации и т.п. Именно в этот момент качественные химические реакции приходят на помощь, являясь отправной точкой для дальнейших размышлений. Не менее важен функциональный и элементный анализ при идентификации абсолютно неизвестного соединения, когда исследователь не имеет ни малейшего представления о строении соединения и нуждается в точке опоры, с которой можно начать движение. Задача данного методического пособия – познакомить с основами качественного элементного и функционального анализа, а также научить использовать сведения о растворимости в идентификации органических соединений. 4 1 Качественный элементный анализ Хотя очевидно, что органическое соединение содержит углерод и водород, полезно все же провести определение этих элементов с помощью качественных реакций. Особенно важными эти реакции могут оказаться при обнаружении примесей органических соединений в неорганических материалах. 1.1 Обнаружение углерода и водорода Обнаружение углерода озолением вещества с триоксидом молибдена. Все органические вещества являются восстановителями. Нагревание их при 500 °С со светло-желтым триоксидом молибдена приводит к образованию низших оксидов молибдена, окрашенных в синий цвет (молибденовая синь). Эту реакцию можно рассматривать как разновидность сожжения, в которой триоксид молибдена играет роль окислителя. Окисление органического соединения может быть представлено уравнением: R 8MoO3 + H C H 4Mo2O5 + CO2 + H2O R При проведении этой реакции надо быть уверенным, что вещество не загрязнено другими соединениями, способными окисляться оксидом молибдена. К таким соединениям, в частности, относятся сульфиты и арсениты щелочных металлов, аммониевые соли. Обнаружение углерода нагреванием с йодатом калия. Йодат калия не разлагается даже при нагревании до 500 °С в течении нескольких часов. Разложение начинается лишь при 560 °С: 2KIO 3 2KI + 6O 2 При нагревании смеси йодата калия с нелетучим органическим соединением йодид калия образуется уже при 300–400 °С, поскольку органические соединения 5 выступают в роли восстановителя. Реакционную смесь после охлаждения растворяют в воде и подкисляют: 5KI + KIO3 + 6HCl 3I2 + 3H2O + 3KCl Образовавшийся в этих условиях йодид калия реагирует с оставшимся йодатом, давая элементарный йод. Последний обнаруживают по посинению крахмала или экстракцией хлороформом (бензолом), который при этом окрашивается в красноватый (сиреневый) цвет. Как и в предыдущей реакции с оксидом молибдена, определение требует отсутствия в пробе неорганических восстановителей. Обнаружение углерода по пиролитическому образованию цианистого водорода. Разложение амида натрия наступает при нагревании до 200 °С. Если этот процесс вести в присутствии нелетучих органических соединений, образуется цианид натрия. Последний обнаруживают с помощью чувствительной реакции с бензидином и ацетатом меди. Реакция основана на том, что при окислении бензидина в уксуснокислом растворе образуется окрашенное соединение («бензидиновая синь»), представляющее собой комплекс с переносом заряда: H2 N NH2 H2 N NH2 + Cu2+ + Cu+ HN NH Сами катионы меди(II) не могут в заметной степени сместить вправо равновесие этой реакции. Образующиеся же при нагревании органического соединения с амидом натрия цианид-ионы необратимо связывают ионы одновалентной меди и тем самым смещают равновесие в сторону образования «бензидиновой сини». К достоинствам данной реакции можно отнести тот факт, что на ее протекание не оказывают влияния присутствие окислителей или восстановителей, однако реакции мешают неорганические соединения, содержащие углерод (карбонаты, цианиды и т.п.). 6 Обнаружение водорода пиролизом с серой. При пиролизе содержащих водород нелетучих органических соединений в присутствии расплавленной серы образуется сероводород. Реакция протекает быстро даже при 250 °С. Выделяющийся сероводород обнаруживают по почернению фильтровальной бумажки, смоченной ацетатом свинца. Однако надо иметь в виду, что вода, выделяющаяся при пиролизе кристаллогидратов, действует как перегретый пар и может также явиться причиной образования сероводорода. Обнаружение углерода и водорода окислением оксидом меди. При нагревании оксид меди(II) окисляет органические соединения до оксида углерода и воды. Углекислый газ обнаруживают с помощью раствора гидроксида бария, а воду по запотеванию холодных частей реакционного прибора. По этой причине, проба исследуемого вещества перед проведением анализа должна быть тщательно высушена. В состав многих органических веществ помимо углерода и водорода входят атомы и других элементов: азота, кислорода, серы, галогенов, фосфора и др. Такие элементы называются органогенами. Для их обнаружения необходимо провести предварительное разложение пробы, чтобы перевести ковалентно построенные органические соединения в ионно построенные соли металлов. Чаще всего это достигается путем сплавления вещества с металлическим натрием (проба Лассеня), реже с карбонатами щелочных металлов. 1.2 Проба Лассеня К небольшому количеству органического вещества в маленькой пробирке добавляют кусочек металлического натрия величиной с горошину. Пробирку нагревают вначале осторожно, как правило, при этом происходит бурная реакция, и содержимое пробирки обугливается, а затем до красного каления и прокаливают в течение некоторого времени (Осторожно, горло пробирки не должно быть направлено на людей!). Очень важно нагреть пробирку до красного каления, 7 иначе азот, содержащийся в пробе, может не перейти в цианид, что даст в дальнейшем неверное заключение о его отсутствии. Раскаленную пробирку опускают в стакан с водой, она растрескивается и образовавшиеся неорганические соли переходят в раствор, который и исследуют на наличие соответствующих элементов. 1.3 Обнаружение азота Обнаружение азота по образованию берлинской лазури. При сплавлении органических соединений с металлическим натрием содержащийся в них азот превращается в цианид натрия. Для его обнаружения хорошие результаты дает использование реакции образования берлинской лазури. К прозрачному фильтрату щелочного раствора, полученного при разложении пробы по Лассеню, прибавляют растворы солей железа(II) и (III), реакционную массу нагревают короткое время, не доводя до кипения. При этом протекают превращения: FeSO4 + 2NaOH Fe(OH)2 + Na2SO4 FeCl3 + 3NaOH Fe(OH)3 + 3NaCl Fe(OH)2 + 2NaCN Fe(CN)2 + 2NaOH Fe(CN)2 + 4NaCN Na4 в результате которых образуется желтая кровяная соль, которая, после подкисления раствора соляной кислотой, реагирует с хлоридом железа(III), давая берлинскую лазурь: Fe(OH)3 + 3HCl FeCl3 + 3H2O 3Na4 + 4FeCl3 Fe43 + 12NaCl Реакция очень чувствительна и, если в исследуемом веществе содержится мало азота, то о его наличии можно судить по образованию после подкисления зеленовато-синего окрашивания. 8 Обнаружение азота по реакции с полисульфидом аммония и хлоридом железа(III). К раствору, полученному после разложения вещества по Лассеню, прибавляют раствор полисульфида аммония и выпаривают досуха. После этого сухой остаток подкисляют соляной кислотой, нагревают и профильтровывают. К фильтрату прибавляют несколько капель раствора хлорида железа(III). Появление красного окрашивания является подтверждением наличия азота: NaCN + (NH4)2Sx NaSCN + (NH4)2Sx-1 6NaSCN + FeCl3 Na3Fe(SCN)6 + 3NaCl Если раствор после добавления хлорида железа приобретает синюю или сине- зеленую окраску, значит, при проведении пробы Лассеня остаток не был тщательно прокален, и азот не полностью перешел в цианид натрия. 1.4 Обнаружение серы При сплавлении органических серосодержащих соединений с металлическим натрием образуется сульфид натрия. Для обнаружения в полученном растворе серы его подкисляют уксусной кислотой, а затем добавляют ацетат свинца. Образование черного осадка сульфида свинца указывает на присутствие серы. Na2S + Pb(CH3COO)2 PbS + CH3COONa Проба с нитропруссидом натрия. К раствору, полученному после разложения по Лассеню, прибавляют несколько капель нитропруссида натрия. Появление сине- фиолетовой окраски указывает на наличие в исходном веществе серы. Na2S + Na2 Na4 + 2NaOH Обнаружение переводом в сероводород пиролитическим восстановлением. Для проведения данной пробы не требуется предварительное разложение вещества. При нагревании формиата натрия выше его температуры плавления (250 °С) он разлагается с выделением водорода: 2HCOONa H2 + Na2C2O4 Если эту реакцию проводить в присутствии нелетучих органических 9 серосодержащих соединений, то выделяется сероводород, который определяют по почернению фильтровальной бумаги, смоченной ацетатом свинца. 1.5 Обнаружение галогенов (общие реакции) Одна из наиболее трудных задач качественного элементного анализа, поскольку необходимо не только установить, содержатся ли в исходном веществе галогены, но и определить какие из них входят в состав молекулы. Проба Бельштейна. Очень простой и в то же время чувствительный способ обнаружения галогенов, не требующий предварительного сплавления с металлическим натрием. Тонкую медную проволоку с петлей или спиралью на конце тщательно прокаливают в верхнем бесцветном пламени горелки до прекращения окрашивания пламени в зеленый цвет. Дают проволоке остыть, после чего на ее конец наносят немного исследуемого вещества и снова помещают в нижнее пламя горелки. Появление зеленого окрашивания, обусловленного летучими галогенидами меди, является указанием на возможное содержание в веществе галогенов. Однако данная проба имеет ряд ограничений, во-первых, фториды меди нелетучи, поэтому обнаружить фтор, входящий в состав органического соединения, этим методом невозможно. Во-вторых, зеленое окрашивание пламени дают некоторые азотсодержащие соединения, например, хинолин, некоторые производные пиридина, мочевина и т.п., поэтому в случае положительной пробы наличие галогенов необходимо подтвердить с помощью других качественных реакций. Проба с тиокетоном Михлера. Позволяет обнаружить хлор, бром и йод. Нелетучее органическое соединение прокаливают в пробирке с карбонатом натрия, образовавшиеся при этом галогениды натрия окисляют хромовой смесью при нагревании. Выделяющиеся галогены обнаруживают по посинению фильтровальной бумажки, смоченной спиртовым раствором тиокетона Михлера: 10
Особенности анализа органических соединений:
- - Реакции с органическими веществами протекают медленно с образованием промежуточных продуктов.
- - Органические вещества термолабильны, при нагревании обугливаются.
В основе фармацевтического анализа органических лекарственных веществ лежат принципы функционального и элементного анализа.
Функциональный анализ - анализ по функциональным группам, т.е. атомам, группам атомов или реакционным центрам, которые определяют физические, химические или фармакологические свойства препаратов.
Элементный анализ используют для испытания подлинности органических лекарственных веществ, содержащих в молекуле атомы серы, азота, фосфора, галогенов, мышьяка, металлов. Атомы этих элементов находятся в элементоорганических лекарственных соединениях в неионизированном состоянии, необходимым условием испытания их подлинности является предварительная минерализация.
Это могут быть жидкие, твердые и газообразные вещества. Газообразные и жидкие соединения в основном обладают наркотическим действием. Эффект снижается от F - Cl - Br - I. Йодопроизводные в основном обладают антисептическим действием. Связь C-F; C-I; C-Br; C-Cl является ковалентной, поэтому для фармацевтического анализа ионные реакции используют после минерализации вещества.
Подлинность препаратов жидких галогенпроизводных углеводородов устанавливают по физическим константам (температура кипения, плотность, растворимость) и по наличию галогена. Наиболее объективным является способ установления подлинности по идентичности ИК-спектров препарата и стандартных образцов.
Для доказательства наличия галогенов в молекуле используют пробу Бейльштейна и различные методы минерализации.
Таблица 1. Свойства галогенсодержащих соединений
Хлорэтил Aethylii cloridum (МНН Ethylchloride) |
Фторотан
|
Бромкамфора 3-бром-1,7,7,триметилбицикло-гептанон-2 |
Жидкость прозрачная, бесцветная, легко летучая, со своеобразным запахом, трудно растворима в воде, со спиртом и эфиром смешивается в любых соотношениях. |
Жидкость без цвета, прозрачная, тяжелая, летучая, с характерным запахом, мало растворима в воде, смешивается со спиртом, эфиром, хлороформом. |
Белый кристаллический порошок или бесцветные кристаллы, запаха и вкуса, очень плохо растворим в воде, легко в спирте и хлороформе. |
Bilignostum pro injectionibus Билигност Бис-(2,4,6-трийод-3-карбоксианилид) адипиновой кислоты |
Бромизовал 2-бромизовалерианил-мочевина |
|
Белый кристаллический порошок, слабо горького вкуса, практически не растворим в воде, спирте, хлороформе. |
Белый кристаллический порошок или бесцветные кристаллы со слабым специфическим запахом, мало растворим в воде, растворим в спирте. |
Проба Бейльштейна
Наличие галогена доказывается путем прокаливания вещества в твердом состоянии на медной проволоке. В присутствии галогенов, образуются галогениды меди, окрашивающие пламя в зеленый или сине-зеленый цвет.
Галогены в органической молекуле связаны ковалентной связью, степень прочности которой зависит от химического строения галогенпроизводного, поэтому для отщепления галогена перевода его в ионизированное состояние необходимы различные условия. Образовавшиеся галогенид-ионы обнаруживают обычными аналитическими реакциями.
Хлорэтил
· Метод минерализации - кипячение со спиртовым раствором щелочи (учитывая низкую температуру кипения, определение ведут с обратным холодильником).
CH 3 CH 2 Cl+KOH c KCl +C 2 H 5 OH
Образовавшийся хлорид-ион обнаруживают раствором серебра нитрата по образованию белого творожистого осадка.
Сl- + AgNO 3 > AgCl + NO 3 -
Фторотан
· Метод минерализации - сплавление с металлическим натрием
F 3 C-CHClBr + 5Na + 4H 2 O> 3NaF + NaCl + 2NaBr + 2CO 2
Образовавшиеся хлорид- и бромид -ионы обнаруживают раствором серебра нитрата по образованию белого творожистого и желтоватого осадков.
Фторид-ион доказывают реакциями:
- - реакция с раствором ализаринового красного и раствором нитрата циркония, в присутствии F- красное окрашивание переходит в светло-желтое;
- - взаимодействие с растворимыми солями кальция (выпадает белый осадок фторида кальция);
- - реакция обесцвечивания роданида железа (красный).
- · При добавлении к фторотану конц. H 2 SO 4 , препарат находится в нижнем слое.
Бромизовал
· Метод минерализации - кипячение со щелочью (щелочной гидролиз в водном растворе), появляется запах аммиака:
· Нагревание с конц. серной кислотой - запах изовалериановой кислоты
Бромкамфора
· Метод минерализации методом восстановительная минерализация (с металлическим цинком в щелочной среде)
Бромид-ион определяют реакцией с хлорамином Б.
Билигност
- · Метод минерализации - нагревание с концентрированной серной кислотой: отмечается появление фиолетовых паров молекулярного йода.
- · ИК-спектроскопия - 0,001% раствор препарата в 0,1 н растворе натрия гидроксида в области от 220 до 300 нм имеет максимум поглощения при л=236 нм.
Йодоформ
- · Методы минерализации:
- 1) пиролиз в сухой пробирке, выделяются фиолетовые пары йода
- 4CHI 3 + 5O 2 > 6I 2 + 4CO 2 + 2H 2 O
- 2) нагревание с конц. серной кислотой
- 2CHI 3 + H 2 SO 4 > 3I 2 + 2CO 2 + 2H 2 O + SO 3
Доброкачественность (чистота галогенсодержащих углеводородов).
Проверку доброкачественности хлорэтила и фторотана проводят, устанавливая кислотность или щелочность, отсутствие или допустимое содержание стабилизаторов (тимола во фторотане - 0,01%), посторонних органических примесей, примесей свободного хлора (брома во фторотане), хлоридов, бромидов, нелетучего остатка.
- 1) Хлорэтил: 1. Определяют t кипения и плотность,
- 2. Недопустимую примесь спирта этилового (реакция образования йодоформа)
- 2) Билигност: 1. Нагревание с кH 2 SO 4 и образование фиолетовых паров I 2
- 2. ИК-спектроскопия
- 3) Фторотан: 1. ИК-спектроскопия
- 2. t кипения; плотность; показатель преломления
- 3. не должно быть примесей Cl- и Br-
Количественное определение хлорэтила ГФ не предусматривает, но оно может быть выполнено методом аргентометрии или меркуриметрии.
Метод количественного определения - обратное аргентометрическое титрование по Фольгарду после минерализации (реакцию см. в определении подлинности).
1. Реакция перед титрованием:
фармацевтический лекарственный хлорэтил титрование
NaBr + AgNO 3 > AgBrv+ NaNO 3
2. Реакция титрования:
AgNO 3 + NH 4 SCN > AgSCN v + NH 4 NO 3
- 3. В точке эквивалентности:
- 3NH 4 SCN + Fe(NH 4)(SO 4) 2 >
Метод количественного определения - аргентометрическое титрование по Кольтгоффа после минерализации (реакции см. в определении подлинности).
- 1. Реакция перед титрованием:
- 3NH 4 SCN + Fe(NH 4)(SO 4) 2 > Fe (SCN) 3 + 2 (NH 4) 2 SO 4
точное количество буровато-красный
2. Реакция титрования:
NaBr + AgNO 3 > AgBrv+ NaNO 3
3. В точке эквивалентности:
AgNO 3 + NH 4 SCN > AgSCNv + NH 4 NO 3
обесцвечивание
Билигност
Метод количественного определения - косвенная йодометрия после окислительного расщепления билигноста до йодата при нагревании с раствором перманганата калия в кислой среде, избыток перманганата калия удаляют с помощью нитрата натрия, а для удаления избытка азотистой кислоты к смеси прибавляют раствор мочевины.
Титрант - 0,1 моль/л раствор натрия титсульфата, индикатор - крахмал, в точке эквивалентности наблюдают исчезновение синей окраски крахмала.
Схема реакции:
t; KMnO 4 +H 2 SO 4
RI 6 > 12 IO 3 -
Реакция выделения заместителя:
КIO 3 + 5KI + 3H 2 SO 4 >3I 2 + 3K 2 SO 4 + 3H 2 O
Реакция титрования:
I 2 +2Na 2 S 2 O 3 > 2NaI+Na 2 S 4 O 6
Йодоформ
Метод количественного определения - обратное аргентометрическое титрование по Фольгарду после минерализации.
Минерализация:
CHI 3 + 3AgNO 3 + H 2 O> 3AgI + 3HNO 3 + CO 2
Реакция титрования:
AgNO 3 + NH 4 SCN > AgSCN v + NH 4 NO 3
В точке эквивалентности:
3NH 4 SCN + Fe(NH 4)(SO 4) 2 > Fe (SCN) 3 v + 2 (NH 4) 2 SO 4
Хранение
Хлорэтил в ампулах в прохладном, защищенном от света месте, фторотан и билигност в склянках оранжевого стекла в сухом прохладном, защищенном от света месте. Бромкамфору хранят в склянках оранжевого стекла в сухом прохладном месте.
Хлорэтил используют для местной анестезии, фторотан для наркоза. Бромкамфору применяют в качестве седативного средства (иногда для остановки лактации). Бромизовал является снотворным средством, билигност применяют в качестве рентгеноконтрастного вещества в виде смеси солей в растворе.
Литература
- 1. Государственная фармакопея СССР / Министерство здравоохранения СССР. - Х изд. - М.: Медицина, 1968. - С. 78, 134, 141, 143, 186, 373,537
- 2. Государственная фармакопея СССР Вып. 1. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / Министерство здравоохранения СССР. - 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1989. - С. 165-180, 194-199
- 3. Лекционный материал.
- 4. Фармацевтическая химия. В 2 ч.: учебное пособие / В. Г. Беликов - 4-е изд., перераб. и доп. - М.: МЕДпресс-информ, 2007. - С. 178-179, 329-332
- 5. Руководство к лабораторным занятиям по фармацевтической химии. Под редакцией А.П. Арзамасцева, стр.152-156.
Приложение 1
Фармакопейные статьи
Билигност
Бис-(2,4,6-трийод-З-карбоксианилид) адипиновой кислоты
C 20 H 14 I 6 N 2 O 6 M. в. 1139,8
Описание. Белый или почти белый мелкокристаллический порошок слабо горького вкуса.
Растворимость. Практически нерастворим в воде, 95% спирте, эфире и хлороформе, легко растворим в растворах едких щелочей и аммиака.
Подлинность. 0,001% раствор препарата в 0,1 н. растворе едкого натра в области от 220 до 300 нм имеет максимум поглощения при длине волны около 236 нм.
При нагревании 0,1 г препарата с 1 мл концентрированной серной кислоты выделяются фиолетовые пары йода.
Цветность раствора. 2 г препарата растворяют в 4 мл 1 н. раствора едкого натра, фильтруют и промывают фильтр водой до получения 10 мл фильтрата. Окраска полученного раствора не должна быть интенсивнее эталона № 4б или № 4в.
Проба с перекисью водорода. К 1 мл полученного раствора прибавляют 1 мл перекиси водорода; в течение 10--15 минут не должна появляться муть.
Соединения с открытой аминогруппой. 1 г препарата взбалтывают с 10 мл ледяной уксусной кислоты и фильтруют. К 5 мл прозрачного фильтрата прибавляют 3 капли 0,1 мол раствора нитрита натрия. Через 5 минут появившаяся окраска не должна быть интенсивнее эталона №2ж.
Кислотность. 0,2 г препарата встряхивают в течение 1 минуты с кипящей водой (4 раза по 2 мл) и фильтруют до получения прозрачного фильтрата. Объединенные фильтраты титрую! 0,05 н. раствором едкого натра (индикатор--фенолфталеин). На титрование должно расходоваться не более 0,1 мл 0,05 н. раствора едкого натра.
Хлориды. 2 г препарата взбалтывают с 20 мл воды и фильтруют до получения прозрачного фильтрата. 5 мл фильтрата, доведенные водой до 10 мл, должны выдерживать испытание на хлориды (не более 0,004% в препарате).
Фосфор. 1 г препарата помещают в тигель и озоляют до получения белого остатка. К остатку прибавляют 5 мл разведенной азотной кислоты и упаривают досуха, после чего остаток в тигле хорошо перемешивают с 2 мл горячей воды и фильтруют в пробирку через маленький фильтр. Тигель и фильтр промывают 1 мл горячей воды, собирая фильтрат в ту же пробирку, затем прибавляют 3 мл раствора молибдата аммония и оставляют на 15 минут в бане при температуре 38--40° Испытуемый раствор может иметь желтоватую окраску, но должен оставаться прозрачным (не более 0,0001% в препарате).
Иодмонохлорид. 0,2 г препарата взбалтывают с 20 мл воды и фильтруют до получения прозрачного фильтрата. К 10-мл фильтрата добавляют 0,5 г йодида калия, 2 мл соляной кислоты и 1 мл хлороформа. Хлороформный слой должен оставаться бесцветным.
Железо. 0,5 г препарата должны выдерживать испытание на железо (не более 0,02% в препарате). Сравнение проводят с эталоном, приготовленным из 3,5 мл эталонного раствора Б и 6,5 мл воды.
Сульфатная зола из 1 г препарата не должна превышать 0,1%.
Тяжелые металлы. Сульфатная зола из 0,5 г препарата должна выдерживать испытание на тяжелые металлы (не более 0,001% в препарате).
Мышьяк. 0,5 г препарата должны выдерживать испытание на мышьяк (не более 0,0001 % в препарате).
Количественное определение. Около 0,3 г препарата (точная навеска) помещают в мерную колбу емкостью 100 мл, растворяют в 5 мл раствора едкого натра, доливают водой до метки и перемешивают. 10 мл полученного раствора помещают в колбу емкостью 250 мл, прибавляют 5 мл 5% раствора перманганата калия и осторожно по стенкам колбы, при перемешивании, прибавляют 10 мл концентрированной серной кислоты по 0,5--1 мл и оставляют на 10 минут. Затем прибавляют медленно, по 1 капле через 2--3 секунды, при энергичном перемешивании. раствор нитрита натрия до обесцвечивания жидкости и растворения двуокиси марганца. После этого сразу прибавляют 10 мл 10% раствора мочевины и перемешивают до полного исчезновения пузырьков, смывая при этом со стенок колбы нитрит натрия. Затем к раствору прибавляют 100 мл воды, 10 мл свежеприготовленного раствора йодида калия и выделившийся йод титруют 0,1 н. раствором тиосульфата натрия (индикатор -- крахмал).
1 мл 0,1 н. раствора тиосульфата натрия соответствует 0,003166 г C 20 H 14 l 6 N 2 0 6 , которого в препарате должно быть не менее 99.0%.
Хранение. Список Б. В банках оранжевого стекла, в защищенном от света месте.
Рентгеноконтрастное средство.
Йодоформ
Трийодметан
СНI 3 М.в. 393,73
Описание. Мелкие пластинчатые блестящие кристаллы или мелкокристаллический порошок лимонно-желтого цвета, резкого характерного устойчивого запаха. Летуч уже при обыкновенной температуре, перегоняется с водяным паром. Растворы препарата быстро разлагаются от действия света и воздуха с выделением йода.
Растворимость. Практически нерастворим в воде, трудно растворим в спирте, растворим в эфире и хлороформе, мало растворим в глицерине. жирных и эфирных маслах.
Подлинность, 0,1 г препарата нагревают в пробирке на пламени горелки; выделяются фиолетовые пары йода.
Температура плавления 116--120° (с разложением).
Красящие вещества. 5 г препарата энергично взбалтывают в течение 1 минуты с 50 мл воды и фильтруют. Фильтрат должен быть бесцветным.
Кислотность или щелочность. К 10 мл фильтрата прибавляют 2 капли раствора бромтимолового синего. Появившееся желто-зеленое окрашивание должно перейти в синее от прибавления не более 0,1 мл 0,1 н. раствора едкого натра или в желтое от прибавления не более 0,05 мл 0,1 н. раствора соляной кислоты.
Галогены. 5 мл того же фильтрата, разведенные водой до 10 мл, должны выдерживать испытание на хлориды (не более 0,004% в препарате).
Сульфаты. 10 мл того же фильтрата должны выдерживать испытание на сульфаты (не более 0,01% в препарате).
Зола из 0,5 г препарата не должна превышать 0,1%.
Количественное определение. Около 0,2 г препарата (точная навеска) помещают в коническую колбу емкостью 250--300 мл, растворяют в 25 ли 95% спирта, прибавляют 25 мл 0,1 н. раствора нитрата серебра, 10 мл азотной кислоты и нагревают с обратным холодильником на водяной бане в течение 30 минут, защищая реакционную колбу от света. Холодильник промывают водой, в колбу прибавляют 100 мл воды и избыток нитрата серебра оттитровывают 0,1 н. раствором роданида аммония (индикатор -- железоаммониевые квасцы).
Параллельно проводят контрольный опыт.
1 мл 0,1 н. раствора нитрата серебра соответствует 0,01312 г СНI 3 , которого в препарате должно быть не менее 99,0%.
Хранение. В хорошо укупоренной таре, предохраняющей от действия света, в прохладном месте.